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3肾上腺素能受体的研究进展 独立神经系统包括交感神经和副交感神经，分布于内脏、心血管和腺体，以调节这些器官的功能。副交感神经通过去甲肾上腺素 (norepinephrine, NE) 与α、β肾上腺素受体结合发挥作用。β3肾上腺素能受体 (β3-adrenoceptor, β3-AR) 是继β1-AR、β2-AR后发现的又一β肾上腺素受体。1989年, Emorine等最先在人类脂肪细胞中克隆出β3-AR基因, 并于豚鼠和猫心脏中发现β3-AR。1996年, Gauthier等通过反转录-聚合酶链反应 (reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR) 对心脏移植者心内膜活检, 首次在人体心脏组织内发现了β3-AR的mRNA。迄今, 研究者对β3-AR的分子结构、信号转导途径等方面进行了研究, 对β3-AR在人体各组织器官病理生理状态下发挥的功能作用也进行了深入的探讨。 1 -ar的结构 β3-AR与β1-AR、β2-AR同属G蛋白偶联7次跨膜受体, 包括3个环的细胞内区、7次跨膜区和3个环的细胞外区。细胞外的N端含有若干糖基化位点, 为配体的结合位点;位于细胞内的第2、3环及C端则在发生变构时暴露Gi蛋白的作用位点。在第2和第3个细胞外环中, Cys110和Cys189间形成的二硫键区是β3-AR与配体结合和激活受体的重要位点。与β1-AR、β2-AR不同, β3-AR具有独特的结构: (1) β3-AR由408个氨基酸残基组成, 较β1-AR、β2-AR氨基酸残基少, 导致β3-AR细胞内第3环和C端缺乏蛋白激酶A (protein kinase A, PKA) 和β肾上腺素受体激酶 (β-adrenoceptor kinase, βARK) 磷酸化位点, 使得β3-AR可抵制激动剂短期刺激作用导致的脱敏。此外, β3-AR可抵制激动剂长期刺激导致的下调。 (2) β3-AR与内源性儿茶酚胺的亲和性较低, 只有在较高浓度的儿茶酚胺作用下才会被激活, 因而当交感神经长期激活, β1-AR、β2-AR介导的反应减弱时, β3-AR介导的反应可以被保留。 2 第2信号级联放 β3-AR通过鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 (G蛋白) 影响某些酶的活性继而引起细胞内第2信使的产生, 随后通过信号级联放大产生生物效应。β3-AR可以结合Gi蛋白和Gs蛋白, 而无需受体磷酸化过程。 2.1 -ar-ac-cac-msin重组蛋白的表达 在脂肪组织, 与β1-AR、β2-AR信号转导途径相同, β3-AR偶联Gs蛋白。β3-AR与配体结合后激活腺苷酸环化酶 (adenylate cyclase, AC) 、增加细胞内环腺苷酸 (cyclic adenosine monophosphate, c AMP) 的水平, 即通过AC-c AMP-PKA途径, 激活c AMP依赖的PKA/激素敏感性脂肪酶 (hormone-sensitive lipase, HSL) 途径加速脂肪分解。在棕色脂肪中, β3-AR激活提高了其内部线粒体内膜解偶联蛋白mRNA的表达, 发挥解偶联作用, 从而导致产热效应。 在心房组织中, β3-AR与Gs蛋白偶联, 同样也通过AC-c AMP-PKA途径作用, 可引起类似于β1-AR、β2-AR效应。 2.2 -ar激动剂cmp的激活作用 在心室肌细胞中, β3-AR是通过Gi-e NOS-NO-c GMP发挥负性变力效应的。1998年有研究证实, Gi蛋白阻滞剂百日咳毒素可阻断β3-AR激动剂BRL37344对心室肌的负性变力效应。随后Gauthier利用心力衰竭大鼠证实了心肌的内皮型一氧化氮合酶 (endothelial nitric oxide synthase, e NOS) mRNA和蛋白表达水平以及心肌环鸟苷酸 (cyclic guanylic acid, c GMP) 水平较正常大鼠组显著升高。预先用c GMP阻滞剂或者c GMP蛋白激酶阻滞剂, 均可以阻止β3-AR的负性肌力作用。非选择性NOS阻滞剂NG-硝基-L-精氨酸甲基酯 (N-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME) 和NG-硝基-I-甲基-精氨酸 (NG-monomethyl-L-arginine, L-NMMA) 可以降低c GMP的水平, 从而阻止了β3-AR激动剂引起的负性肌力作用, 而且这种作用可以被NOS底物 (L-精氨酸) 的存在所逆转. 在心肌细胞中, c GMP可产生以下几种效应: (1) 在豚鼠心肌细胞中, β3-AR激动剂可抑制漫延迟整流钾电流 (IKs) , 使动作电位时间 (action potential duration,