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17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠在大鼠体内的组织分布 西炎平注射液由穿心莲内磺化物组成。这是江西巨龙药业有限公司的首次产品。该注射液具有清热解毒, 止咳止痢之功效。在临床上广泛用于支气管炎、扁桃体炎、细菌性痢疾等。17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠 (Sodium 9-dehydro-17-hydro-andrographolide-19-yl sulfate, DHAS) 是喜炎平注射液的主要活性成分, 据报道该活性成分在喜炎平注射液中的含有量为0.8mg/m L。体外实验显示17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠有抗菌、抗病毒、抗炎活性。近年来, 国内穿心莲内酯测定研究报道较多[8,9,10,11,12,13,14], 但有关喜炎平注射液中有效成分17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠在大鼠体内组织分布方面的研究国内外至今尚无报道。本实验采用UHPLC-MS/MS法测定尾静脉注射给药后, 大鼠体内各器官组织中17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠的量, 并进行组织分布研究, 为临床合理用药和新药开发提供参考。 1 设备和材料 1.1 高速分散器/分液器 德国Sartorius TE212—L、Sartorius BT255型电子天平;美国必能信BUG 25—06型 (25 KHZ, 250 W) 超声仪;上海精科Vortex XW—80A型旋涡混合器;宁波新芝XHF—D型高速分散器 (内切式匀浆机) ;德国SORVALL pico高速离心机;美国Thermo Finnpipette移液枪 (100~1000μL) ;德国BRAND Tripette移液枪 (20~200μL) ;美国Waters有机针筒过滤器 (0.22μm) ;美国Agilent 1290超高效液相色谱仪 (在线脱气机、二元超高压梯度泵、控温自动进样器, 柱温箱) ;美国Applied Biosystem API 4000三重串联四极杆质谱仪, Analystue5f8工作站;美国安捷伦Zorbax SB-C18色谱柱 (2.1 mm×150 mm, 1.8μm) 。 1.2 聚氢-9-去氢穿心莲两-硫酸酯单体注射液 乙腈、甲醇、乙酸铵 (美国SIGMA-ALDRICH公司, 色谱级) ;纯化水 (Mili-Q系统制备) ;氯化钠 (西陇化工有限公司, 分析纯) ;17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠单体注射液 (江西青峰药业有限公司制备) ;17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠对照品 (本所自制, 纯度大于99.0%) ;亚硫酸氢钠穿心莲内酯 (Internal Standard, IS, 购自中国药品生物制品检定所, 批号:111655-200301) 。 1.3 动物的教育培养 SD大鼠, 雌雄各半, 体质量 (200±20) g, 购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司, 动物房温度 (25±2) ℃, 湿度 (55±5) %, 每日光照时间12 h;动物饲料购自北京科澳协力饲料有限公司。 2 方法和结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠对照品适量, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 制成质量浓度为100μg/m L对照品贮备液, 分别精密吸取不同体积的对照品贮备液至量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 分别制成2.5、25、100、250、500、1 500、2 500、3 500、5 000ng/m L的对照品溶液, 放置冰箱内避光冷藏。 2.2 内标贮备液配制 精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯标准品适量, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 制成质量浓度为100μg/m L的内标贮备液;精密吸取上述内标贮备液适量至量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 制成质量浓度为150 ng/m L的内标溶液。 2.3 高速离心检测 取大鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠, 用生理盐水洗干净表面残血, 用滤纸吸干, 剔除结缔组织, 称定质量, 加生理盐水用高速匀浆机彻底匀浆制成0.6 g/m L组织样品匀浆液。分别精密吸取空白心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠匀浆液各0.2 m L, 置1.5 m L尖底离心管中, 分别加入0.2 m L甲醇溶液, 0.6 m L内标溶液, 涡旋混合1 min, 放入高速离心机中, 13 000 r/min离心5 min。取上清液过0.22μm有机滤膜后, 以5μL进LC-MS/MS进行分析。 2.4 对照品处理方法 分别精密吸取空白心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠匀浆液0.2 m L, 置1.5 m L尖底离心管中, 分别加入0.2 m L对照品溶液 (质量浓度为25、2 500、5 000 ng/m L) 的和0.6 m L内标溶液, 按2.3项方法处理。制备成低、中、