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ez-n5转座复合物的电转化及对抗菌药物敏感性研究 现在，细菌抗剂的现象非常严重。随着广光谱高效抗剂的广泛使用和滥用，以及选择压力下泛服药铜绿假单胞菌、泛棕榈醇非生菌和泛丙烯酸肺炎克隆比菌的情况，在开发新旧药物的使用中，必须充分了解各种抗药性药物的抗剂机制。一般肠杆菌科的耐药机制:细菌产生灭活酶或钝化酶对抗菌药物的灭活与修饰;抗菌药物作用靶位的改变;膜对抗菌药物的通透性下降, 药物摄入减少;膜对抗菌药物的主动外排, 药物排出增加;细菌形成生物被膜等。我们常用的研究细菌耐药机制的方法是出现一种新的耐药表型后, 再研究该表型背后的基因机制。但是在一种新的耐药机制出现之前, 这种方法则无从下手, 显得十分被动。En-Tn5转座子试剂盒能够随机、单拷贝、稳定地插入细菌基因组, 从而造成一系列携带单拷贝转座子插入的克隆子, 给研究人员提供了依次灭活细菌基因组基因的途径。本研究即利用En-Tn5试剂盒的这一特征, 构建一系列单基因转座子灭活文库, 然后用抗菌药物 (除氨基糖苷类外) 进行克隆子药敏试验, 以期从筛选到的药敏表型的克隆子中发现新的耐药机制。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 蘑菇和颗粒 大肠埃希菌标准菌株BL21, 质粒pUC19购自上海申能博彩公司。 1.1.2 座混合物tnptranspos其4 购自Epicentre Biotechnologies公司。EZ-