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九章节酶免疫技术 1 第二节酶免疫技术的分类 一、均相酶免疫测定 二、非均相酶免疫测定 第三节 酶联免疫吸附试验 一、基本原理 二、方法类型及反应原理 思考题 小结 2 3 4 5 6 7 8 用于均相酶 免疫测定 常用酶 9 HRP的底物 常用底物 HRP 10 2,2′-氨基-二(3-乙基-苯并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 ABTS 5-氨基水杨酸5-ASA 常用底物 四甲基联苯胺 TMB 邻苯二胺 OPD HRP的常见底物 11 TMB反应后显蓝色 ， 加酸终止反应后变 为黄色,测定波长 450nm ，稳定，无 致癌性， ELISA中应 用最广泛的底物。 OPD反应后显橙黄 色，加酸终止反 应后呈棕黄色， 测定波长492nm。 不稳定，致癌性。 HRP的常见底物 12 经AP作用后的产物为黄色对 硝基酚，最大吸收峰波长为 405 nm。 酶作用后，生成高强度 荧光物 ，用荧光计 测 量。 4-甲基伞酮基β-D 半-乳糖苷( 4MUG 常用底物 β-Gal 的底物 AP的 底物 ) 13 通过化学反应或免 疫学反应，让酶与 抗体或抗原形成的 结合物 14 Ø抗体需要特异性好、效价高、亲 合力强以及比活性较高，能批量生 产，易纯化。 Ø抗原要求纯度高，抗原性完整 15 酶标记物稳定 ，不形成聚合物 16 过碘酸钠法(直接法) 常用于HRP标记抗体或抗原 戊二醛交