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土壤酶活性测定方法 该实验根据每天的工作量，应保持在28个样为宜，上午14个样，下午14个样，各底物和标样（MUB）均配置50 ml，分三等份保存于-20℃冰箱。具体实验步骤整理如下： 表1?配置50 ml MUB和底物所需质量 底物编号 Enzyme Abbreviation Substrate m 7 过氧化物酶 Peroxidas Peo L-DOPA3 ?0.0493 g ?0.0493 g 8 酚氧化酶 Phenol oxidase PhO L-DOPA 1 α-1,4-葡萄糖苷酶 α-1,4-Glucosidase αG 4-MUB2-α-D-glucoside 3.3831 mg 2 β-1,4-葡糖糖苷酶 β-1,4-Glucosidase βG 4-MUB-β-D-glucoside 3.3831 mg 3 纤维二糖水解酶 β-D-Cellobiohydrolase CBH 4-MUB-β-D-cellobioside 5.0045 mg 4 亮氨酸氨肽酶 Leucine amino peptidase LAP L-Leucine-7-amino-4-methylcoumarin 3.2480 mg 5 β-1,4-N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶β-1,4-N-Acetyl-glucosaminidase NAG 4-MUB-N-acetyl-β-D-glucosaminide 3.7936 mg 6 酸性磷酸酶 Acid phosphomonoesterase ACP 4-MUB-phosphate 2.5615 mg 9 β-1,4-木糖酶 β-1,4-Xylosidase βX 4-MUB-β-D-xyloside 3.0828 mg 脲酶?Urease Urease Urea 蛋白酶?protease PRO casein 1、The enzymes involved in this cycling process 2、4-MUB, 4-methylumbelliferyl 3、L-DOPA, L-3,4-dihydroxyphenylalanine 注：L-DOPA为L-3, 4-二羟基苯丙氨酸，标准物MUB为4-甲基伞形酮，标准物AMC为7-氨基-4-甲基香豆素。 提前一天配置所需试剂: ① 50 mmol L-1醋酸钠缓冲液（pH=5）： 4.1015 g醋酸钠，去离子水定容至1 L。 ② 1 M NaOH溶液：2 g NaOH，去离子水定容至50 ml。 ③ 0.3% H2O2溶液：0.5 ml 30% H2O2，去离子水定容到50 ml，保存于50 ml离心管。 ④ 50 ml各底物的配置按照下列公式计算： 所需的样品m (mg) = CVM = 200 uM L-1×10-6×V×10-3 × M×103 其中，M4-MUB-α-D-glucoside =338.31；M4-MUB-β-D-glucoside =338.31；M4-MUB-β-D-cellobioside=500.45；M4-MUB-phosphate=256.15；M4-MUB-N-acetyl-β-D-glucosaminide =379.36；ML-Leucine-7-amino-4-methylcoumarin =324.80；ML-DOPA =197.19；标准品M90-33-5=176.17；V=50 ml。 ⑤ 50 ml 10 uM MUB的配置：先配置50 ml 100 uM MUB母液，百万分之一天平称0.8810 mg MUB，去离子水定容至50 ml容量瓶，保存于50 ml离心管中存储于-20℃冰箱。使用前，吸取5 ml 100 uM MUB母液定容至50 ml。 实验步骤： ① 1~6号酶底物是黑板，7、8号是白板。底物编号（1-8）、板子编号（1-32）及样品编号（1-n）格式为1-1-（1,2,3,4,5,6,7）；1-2-（8,9,10,11,12,13,14）；1-3-（15,16,17,18,19,20,21）；1-4-（22,23,24,25,26,27,28）。2-5-（1,2,3,4,5,6,7）；2-6-（8,9,10,11,12,13,14）；2-7-（15,16,17,18,19,20,21）；2-8-（22,23,24,25,26,27,28）以此类推，8-29-（1,2,3,4,5,6,7）；8-30-（8,9,10,11,12,13,14）；8-31-（15,16,17,18,19,20,21）；8-32-（22,23,24,25,26,27,28）。 ② 土壤悬浊液：称1.00±0.02 g土样于250 ml震荡瓶中→100 ml 50 mmol L-1醋酸钠缓冲液→加小