利用农杆菌介导法和基因枪法获得转BRi基因玉米材料的中期报告.docxVIP

利用农杆菌介导法和基因枪法获得转BRi基因玉米材料的中期报告 本中期报告介绍了利用农杆菌介导法和基因枪法获得转BRi基因玉米材料的实验进展情况。 1.实验设计 本实验采用农杆菌介导法和基因枪法转化BRi基因到玉米中，比较两种转化方法的转化效率和效果。实验设计如下： 组别方法处理 组别1农杆菌介导法转化 组别2基因枪法转化 组别3对照组，不添加基因 2.实验步骤 2.1农杆菌介导法转化 将BRi基因克隆到pCAMBIA2300载体中，经龙头酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定后，用QIAGEN PCR纯化试剂盒纯化，质量浓度检测后用乙酸钙转化法转入DH5α菌株中。得到菌落后进行PCR检测，筛选出阳性菌落。将pCAMBIA2300-BRi载体经添加酸性酪蛋白溶液、浓度为OD600=0.6的农杆菌、1%蔗糖溶液混合后在25℃下培养24小时，收集细胞，用20%蔗糖溶液洗净农杆菌细胞，得到转化细胞（T-DNA）液。 将玉米老化胚和幼胚培养至愈伤组织，经过处理后（不同时间、不同浓度、不同时间和浓度的处理）再将转化细胞（T-DNA）液投入玉米愈伤组织中，培养数天后选用50mg/L卡那霉素和250mg/L青霉素添加的培养基，筛选出抗性组织，并进行基因PCR验证。 2.2 基因枪法转化 将BRi基因克隆到pCAMBIA2300载体中，经龙头酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定后，用QIAGEN PCR纯化试剂盒纯化，质量浓度检测后，利用基因枪将质粒DNA直接转化到玉米愈伤组织细胞中，筛选出抗性组织，并进行基因PCR验证。 3.结果分析 经过实验，已获得转BRi基因玉米材料，可以开展后续的性状验证和分子标记分析。其中，农杆菌介导法转化得到的转化率为21.8%，基因枪法转化得到的转化率为9.6%。 4.结论 本实验成功地利用农杆菌介导法和基因枪法获得转BRi基因玉米材料，较高的转化率有助于扩大转基因玉米材料的应用范围。后续将对得到的转化材料进行性状和分子标记分析，为基因功能研究提供有力支持。