酶蛋白的稳定性和稳定化课件.pptxVIP

Chapter 4 Stability and Stabilizing of Enzyme 第四章 酶蛋白的稳定性和稳定化 o 酶蛋白的稳定性 是指酶蛋白抵抗各种因素的影响，保持其生物活力的 能力。酶特定的空间结构决定其生物活性，因此稳定化的 结果就是保持其空间结构。 o 研究酶蛋白的稳定性不仅对齐基础理论的研究具有重 要意义，对提高其操作和贮存稳定性，扩大酶的使用范围 具有重大的实用价值。 第一节 前 言 一、酶蛋白稳定性的分子原因 1. 金属离子、底物、辅因子和其他低分子量配体的 结合作用； 金属离子等通过与多肽链的结合稳定酶蛋白 的构象，增加酶蛋白的稳定性。 第二节 酶蛋白的稳定性及其变性机理 3.盐桥和氢键 酶蛋白分子中的盐桥对其结构的稳定性具有很显著的 作用。如：嗜热脂肪芽孢杆菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶与来 自兔子的嗜温脱氢酶的三维结构很类似，但嗜热酶亚基间 有盐桥，因此其变性温度和最适温度都比嗜温酶高约20℃。 氢键能维持二级结构，但对酶蛋白稳定性影响不大。 Disulfide bond 5.敏感氨基酸含量低 酶蛋白的变性等反应容易发生在敏感的氨基 酸残基上，如活性部位的氨基酸被氧化是酶蛋白 失活最常见的现象。在稳定的嗜热酶中不稳定氨 基酸的数目明显比相应的嗜温酶蛋白中低。 6.氨基酸残基的坚实装配 酶蛋白的分子结构中有孔隙，通常这些孔隙 被水分子所充满。极性的水分子通过布朗运动与 蛋白质的疏水键接触会导致蛋白质不稳定。若酶 蛋白的结构坚实，则水分子从孔隙中被除去，蛋 白的稳定性也相应增加。 但最近X射线结晶学方法证实，蛋白质非极性表面 上水分子的结构重排，能引起系统的熵值降低和蛋白 质折叠状态的改变： 蛋白质的非极性部分总是倾向于 使其不与水接触，并尽可能的隐藏在蛋白质球体内部， 从而增加蛋白质的稳定性。 o 熔化温度(Tm，酶蛋白变性伸展过程中的温度) o 变性剂浓度(50%伸展所需要的变性剂浓度) o 自由能变化( ΔG) o 最大稳定性温度(Ts) o 相对活力/% (时间t时保留的活力) o 加速降解试验(在较高温度下加速酶失活速度) 二、测定蛋白质稳定性的方法 (1)蛋白水解酶和自溶作用 (2)聚合作用(构象改变、分子间二硫键的交换反应) (3)极端pH (远离等电点时，酶分子内相同电荷间的静电斥力导致蛋白质伸展) (4)氧化作用(部分氨基酸侧链易氧化) (5)表面活性剂和去污剂(与酶蛋白结合，导致疏水氨基酸残基暴露) (6)变性剂： 高浓度盐(结合酶蛋白的带电基团与降低酶蛋白周围的水簇数目) 有机溶剂(改变介电常数、夺水及使疏水基团暴露) 金属离子(螯合) 脲和盐酸胍(消除疏水相互作用及与酶蛋白分子直接作用) 三、蛋白质不可逆失活的原因和机理 一、固定化 二、非共价修饰 三、化学修饰 四、蛋白质工程 第三节 酶蛋白的稳定化