股骨头缺血性坏死患者骨髓瘦素与局部微环境指标相关性研究.docxVIP

股骨头缺血性坏死患者骨髓瘦素与局部微环境指标相关性研究 股骨头坏死（anfh）是骨科常见病之一，通常发生在35至55岁的年轻人。如果不及时治疗，约70%的患者会出现股骨头塌陷和骨关节炎，严重影响生活质量。激素和酒精的过量摄入被认为是ANFH的常见病因,但具体致病机制仍未明确。研究表明,ANFH与骨髓脂肪化相关。瘦素在调节脂代谢与骨代谢中发挥重要作用,可能是联系两种代谢的重要因子。但目前关于瘦素在骨髓微环境中表达情况及其与ANFH关系的报道较少。本研究通过对比ANFH股骨头与正常股骨头局部微环境瘦素水平与骨、脂代谢指标,观察其变化情况。 1 材料和方法 1.1 x线片面表及mri表现 实验标本均由2009年7月-2011年2月于我院接受治疗的患者自愿捐赠。其中ANFH患者16例(ANFH组),年龄46~61岁,平均55.7岁;体重56~64 kg,平均57.2 kg;体重指数(body mass index,BMI)20.7~26.8,平均22.7。左侧9例,右侧7例。其中激素性10例(激素暴露阈值大于或等效于2 000 mg泼尼松龙),酒精性6例(每周饮酒400 m L以上)。均参照Sugano等的标准经X线片与MRI确诊为ANFH。 股骨上段骨折或创伤性骨关节炎患者11例(对照组),年龄50~64岁,平均56岁;体重55~67 kg,平均60.8 kg;BMI 23.1~27.6,平均25.1。左侧6例,右侧5例。患者均排除类风湿性关节炎、结缔组织病、内分泌疾病、肝肾疾病、关节结核及肿瘤等疾病。 两组年龄、体重及BMI比较,差异均无统计学意义(P0.05),具有可比性。患者术前均禁食、禁水超过8 h。 1.2 elisa试验 小鼠抗人瘦素抗体由我院内分泌科实验室馈赠;免疫组织化学试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司);人瘦素、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、可溶性瘦素受体(soluble leptin receptor,s LR)、可溶性NF-κB受体活化因子配基(soluble receptor activator of NF-κB,s RANKL)ELISA试剂盒(北京爱迪博生物科技有限公司)。Lx20 Clinical System全自动生化分析仪(Beckman公司,美国)。 1.3 测试指标 1.3.1 髓内脂肪组织成分分析 按照Martin等的方法进行检测。术中抽取两组患者骨髓约6 m L置于抗凝试管内,吸取其中4 m L脱钙后4~6μm厚连续切片,HE染色。采用标准体视学成像分析技术分析髓内脂肪组织(free fat,FF)含量。采集两组患者空腹非抗凝血3 m L,以600×g离心5 min后获取血清,采用Lx20 Clinical System全自动生化分析仪检测血脂水平,包括甘油三脂(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)。 1.3.2 脱钙、脱水、切片 取ANFH组股骨头标本,沿正中冠状面劈开,制成0.6 cm×0.3 cm×0.2 cm大小骨片;对照组取股骨头松质骨碎片。生理盐水清洗后置于固定液中,4℃固定12~24 h,PBS充分漂洗后,置于脱钙液中,4℃脱钙7~10 d至完全脱钙。蒸馏水冲洗20 min,常规脱水、包埋、切片。按试剂盒说明分别滴加瘦素及瘦素受体抗体进行孵育,PBS冲洗,DAB染色,镜下观察呈黄褐色的瘦素表达阳性细胞。每个标本取3张切片,每个切片取5个视野计数阳性细胞,取均值,按以下公式计算瘦素阳性细胞表达百分率:阳性细胞数/细胞总数×100%。 1.3.3 样本品质测定 取术中抽取的剩余2 m L骨髓同上法离心后,吸取500~800μL上清,按照ELISA试剂盒说明检测标本瘦素、s LR、OPG及s RANKL水平。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(A)值,通过绘制标准曲线计算样品中瘦素、s LR、OPG及s RANKL浓度,并计算瘦素生物学活性及破骨细胞活性,分别以瘦素/s LR及s RANKL/OPG表示。 1.4 生物测定的指导思想比较见表1 应用SPSS13.0统计软件进行分析。数据以均数±标准差表示,组间比较采用t检验;瘦素水平与s LR、瘦素生物学活性、OPG、s RANKL及骨髓FF含量指标间相关性分析采用Pearson相关;检验水准α=0.05。 2 结果 2.1 骨髓ff含量测定t 两组外周血标本血脂水平(TG、TC、LDL)比较,差异均无统计学意义(P0.05),但骨髓FF含量比较差异有统计学意义(t=—14.230,P=0.000)。见表1。 2.2 各组肥素阳性细胞表达情况比较 镜下观察示,两组标本骨细胞及骨髓基质