《规模化肉牛场牛冠状病毒病诊断与防治技 术规程》.pdfVIP

ICS ICS 01.040.65 CCS B 04 TB 团 体 标 准 T/ NAIA×××-×××× 规模化肉牛场牛冠状病毒病诊断与防治技 术规程 Technical regulations for diagnosis, prevention and treatment of Bovine coronavirus disease in large-scale beef cattle farms (征求意见稿) ××××- ××- ××发布 ××××- ××- ××实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布 规模化肉牛场牛冠状病毒病诊断与防治技术规程 1 范围 本文件规定了规模化肉牛场牛冠状病毒病诊断与防治技术的术语和定义、诊断、预防和治疗。 本文件适用于规模肉牛场牛冠状病毒病的防治。其他肉牛场参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 DB15/T 2194-2021 牛冠状病毒PCR检测方法。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 牛冠状病毒病 Bovine coronavirus 是指由牛冠状病毒引发犊牛以出血性腹泻为主要症状的传染病。 4 诊断 4.1 流行病学 牛冠状病毒多发于 7～10 日龄的犊牛。病牛和带毒牛是感染性腹泻的主要传染源。通过消化道、呼 吸道、接触、胎盘和交配等途径传播。本病一年四季均可发生，尤以气候多变、寒冷季节和环境卫 生较差时多发。 4.2 临床症状 犊牛感染后发生腹泻，发病初期出现带血的黄色黏性粪便，后期发展为水泻，有时出现脱水、虚弱、 体温低，少数犊牛出现发热、卧地不起等症状，严重的犊牛会出现昏迷甚至死亡。成年牛常突然暴 发， 排出深褐色带血稀粪，伴有产奶下降、沉郁及厌食等症状。 4.3 病理变化 小肠肠壁变薄、透明，肠腔液体增多，严重者引起腹腔积水，胃内有未消化的凝乳块。感染的牛可 2 能伴随呼吸道症状，表现为气管黏膜充血、局限性肺炎等。 4.4 结果判断 出现4.1 、4.2 、4.3 ，可判定为牛冠状病毒病疑似病例。 5 实验室诊断 5.1 主要仪器设备 电镜、低温高速离心机、倒置显微镜、CO2 细胞培养箱、PCR 仪、电泳仪、凝胶成像仪。 5.2 主要试剂 PBS 、2%磷钨酸、胰酶、HCT-8 细胞、PCR Taq 酶。 5.3 样品采集 5.3.1 粪便样品 将棉拭子伸入肛门内刮取新鲜粪便，放入装有 3 mL PBS 采样管中；也可无菌采集地上刚排出新鲜 粪便。编号并记录相关信息。 5.3.2 组织样品 取病死牛肠道及内容物、肝、脾、淋巴结等，置于无菌密封袋或采样杯内。 5.4 样品处理 对于粪便样品，放入盛有 3 mL PBS 管中，充分振荡， 12000 r/min 4 ℃离心 5 min～8 min ，取上 清备用；对于组织样品，称取 1 g 置于研钵，充分研磨后加 5 mL PBS ，混匀，8000 r/min 4 ℃ 离 心 5 min ，取上清备用。将上清于 0.22 µm 滤器过滤，-80 ℃ 冰箱保存或直接接种细胞。 5.5 病原检测 5.5.1 病原检测 5.5.1.1 电镜检查 将采集的粪便或肠内容物用