《规模化牛场牛病毒性腹泻病毒（BVDV）基 因分型与防制》.pdfVIP

ICS ICS 01.040.65 CCS B 04 TB 团 体 标 准 T/ NAIA×××-×××× 规模化牛场牛病毒性腹泻病毒（BVDV）基 因分型与防制 Technical regulations for genotyping and prevention of bovine viral diarrhea virus (bvdv) in large-scale cattle farms (征求意见稿) ××××- ××- ××发布 ××××- ××- ××实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布 规模化牛场牛病毒性腹泻病毒（BVDV ）基因分型与防制 1 范围 本文件规定了规模化牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)RT-PCR 基因分型与防制的术语和定义、 诊断、预防和净化。 本文件适用于规模化牛场对奶牛、肉牛、黄牛、牦牛、犏牛等牛科动物的牛病毒性腹泻病毒 （BVDV ）RT-PCR 基因分型与防制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB19489-2008 实验室生物安全通用要求 GB/T 27401-2008 实验室质量控制规范 动物检疫 农业部农医发[2017]25号 病死及病害动物无害化处理技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 牛病毒性腹泻病 Bovine Viral Diarrhea Virus 牛病毒性腹泻/黏膜病简称为牛病毒性腹泻病，是指由牛病毒性腹泻病毒引发牛的一种传染病， 临床上以发热、腹泻、呼吸道症状、出血综合征、黏膜糜烂、白细胞减少、怀孕母牛流产、产畸型 胎为主要特征。 3.2 RT-PCR基因分型RT-PCR genotyping 即利用分子生物学方法，对其基因进行分型的技术。 4 流行病学 各种年龄的牛都易感染、以幼龄牛易感性最高。传染来源主要是病畜。病牛的分泌物、排泄物、 血液和脾脏等都含有病毒，以直接接触或间接接触方式传播。牛病毒性腹泻病毒可以穿过胎盘感染， 特别是怀孕早期。牛病毒性腹泻—黏膜病毒血清抗体阴性的母牛一旦感染，常常通过胎盘使胎儿产 生免疫抑制，引起持续性病毒血症，如果小牛正常产出，病毒血症能持续地带入成年期，这种牛体 内始终带毒，是牛群中最危险的传染源。 2 5 RT-PCR基因分型 5.1 样品采集 用无菌注射器直接采集血液或者抗凝血至灭菌离心管，或使用兽用采血针、真空无菌采血管、 真空无菌抗凝管采血管，采集全血或抗凝全血，编号备用。 5.2 样品处理 5.2.1 血清处理 使用无抗凝剂采血器，采血后采血管倾斜于25℃～37℃静置30 min～45 min ，待血液完全凝固， 转速8000 rpm离心10 min或4000 rpm离心30 min ，用移液枪把血清移入储存管备用。 5.2.2 全血的处理 5.2.2.1 采血 使用抗凝枸橼酸葡萄糖（ACD ）为抗凝剂。利用灭菌离心管收集血液时，加入1/6体积的ACD 抗凝剂，充分混匀；利用商品化EDTA抗凝采血管收集血液时，直接收集血液并混匀即可。 5.2.2.2 RNA 的提取 在样本制备区，根据待检样品数量取n个无RNAse离心管，编号。每管中加入600