流式淋巴细胞亚群检测技术原理.pptVIP

T4/T8细胞比值临床意义 器官移植受者免疫功能监测 个体化免疫治疗疗效判断 受者需要的是一种恰当的免疫抑制，将免疫功能控制在较低的一个范围内。 需要经常性监测受者的免疫功能，T4/T8细胞比值是非常好的一个监测指标 当受者T4/T8细胞比值出现小于0.2的情况时，必须立即停用免疫抑制药，等待免疫功能的适当恢复 本文档共43页；当前第30页；编辑于星期二\16点52分 T4/T8细胞比值与肿瘤 恶性肿瘤患者术前T4/T8细胞比值低，手术后比值恢复正常 当发生癌转移时,T3、T4细胞数明显减少的同时T8细胞数明显增多 T4/T8比值明显降低,提示恶性肿瘤患者晚期细胞免疫功能更低,预后更差 本文档共43页；当前第31页；编辑于星期二\16点52分 产生抗体 提呈抗原 ③免疫调节 B细胞的功能 本文档共43页；当前第32页；编辑于星期二\16点52分 B细胞增高 提示机体体液免疫功能被增强 此时体内高亲和力抗体的产生也增加 见于临床各种细菌性感染 B细胞增高也见于B细胞白血病 本文档共43页；当前第33页；编辑于星期二\16点52分 淋巴细胞亚群检测 本文档共43页；当前第1页；编辑于星期二\16点52分 目录 1 淋巴细胞的分类 2 淋巴细胞亚群检测方法 3 淋巴细胞亚群检测原理 4 淋巴细胞亚群的免疫功能 5 淋巴细胞亚群的临床意义 本文档共43页；当前第2页；编辑于星期二\16点52分 T淋巴细胞 细胞免疫 B淋巴细胞 体液免疫 NK细胞 固有免疫 淋巴细胞的分类 淋巴细胞占外周血白细胞总数的20%-40% 本文档共43页；当前第3页；编辑于星期二\16点52分 检测方法 采用流式细胞术（FCM） 是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞(或生物学颗粒)的理化特性进行多参数定量分析和分选的技术 本文档共43页；当前第4页；编辑于星期二\16点52分 FCM 检测对象：单细胞悬液或生物颗粒； 检测参数：多参数； 检测特点：单细胞水平分析； 检测速度：高速，最高达上万个细胞/秒； 检测结果：精度高、准确性好； 可对目标细胞进行分选； 本文档共43页；当前第5页；编辑于星期二\16点52分 荧光抗体 直接标记 第一抗体 荧光二抗 间接标记 免疫荧光染色主要有两种方法。间接标记的方法难以进行多色标记，而且操作复杂，所以一般首选直接荧光染色 检测原理 本文档共43页；当前第6页；编辑于星期二\16点52分 常用荧光素 499nm 蓝色荧光（Blue） 500-549nm，绿色荧光（Green） 550-584nm，黄色荧光（Yellow） 585-615nm，橙色荧光（Orange） 616-700nm，红色荧光（Red） ≥700nm，远红外荧光（Far-Red） 本文档共43页；当前第7页；编辑于星期二\16点52分 常用荧光素 荧光素分子 激发光波长 （nm） 发射光波长 （nm） 中文名 FITC 488 525 异硫氰酸荧光素 PE 488 575 藻红蛋白 PerCP 490 675 多甲藻叶绿素蛋白 APC 633 660 别藻青蛋白 PE-Cy5 488 670 藻红蛋白-花青素5 PE-Cy7 488 755 藻红蛋白-花青素7 本文档共43页；当前第8页；编辑于星期二\16点52分 免疫荧光染色 FCM可检测下列细胞成分： 表面标记物 胞浆标记物 核内标记物 可溶性成分 本文档共43页；当前第9页；编辑于星期二\16点52分 联合CD45的四色方案 第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标记，主要可以检测T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同的亚群 CD45-FITC CD4-RD1 CD8-ECD CD3-PC5 本文档共43页；当前第10页；编辑于星期二\16点52分 联合CD45的四色方案 第二种是用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的标记，用于检测T3细胞、B细胞和NK细胞 CD45-FITC CD56-RD1 CD19-ECD CD3-PC5 本文档共43页；当前第11页；编辑于星期二\16点52分 检测目的 相互协作共同参与 1 2 3 功能 比例 数量 本文档共43页；当前第12页；编辑于星期二\16点52分 T、B细胞相互作用 本文档共43页；当前第13页；编辑于星期二\16点52分 本文档共43页；当前第14页；编辑于星期二\16点52分 主要检测项目 淋巴细胞 总T细胞 T4细胞 T8细胞 NK细胞 B细胞 本文档共43页；当前第15页；编辑于星期二\16点52分 总T淋巴细胞 CD3+