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含ca基因重组腺病毒载体的构建 氧化酶（cat）是人体的一种非常重要的抗氧化物酶。这是b22的重要去除剂，主要分布在氧化酶中。有人用脂质体包埋的超氧化物歧化酶(SOD)和CAT通过静脉注射的方式,使暴露于100%氧气中的小鼠存活率明显上升。另外,Ruh等人也通过静脉注射的方式将CAT用于非类固醇类消炎剂吲哚美辛诱导炎性肠胃道疾病的大鼠模型,发现其具有明显的减轻炎症区域的充血情况,起到抗炎作用。本研究通过对含人CAT基因重组腺病毒载体的构建、重组腺病毒的包装、纯化及鉴定该酶的活性,为进一步研究人CAT基因在基因治疗中的作用奠定基础。 1 材料和方法 1.1 主、副产物及数据 限制性内切酶EcoR V、Kpn I和Sal I,T4 DNA Ligation,pcDNA3.1+, DL 2 000均购自TaKaRa公司。LR clonase II Enzyme mix,pENTR 1A 质粒,pAd/CMV/V5-DEST和pAd/CMV/V5-LacZ载体,脂质体2 000,293A细胞系,感受态细胞DH5a和TOP10菌株均购自Invitrogen公司。 1.2 软件设计结构设计 从GenBank数据库里获得人CAT基因的全长cDNA(NM 001752),用Primer 5.0软件设计。正向引物P1: 5′-AAAGGTACCGCTATGGCTGACAGCC-3′包含酶切位点Kp