第章免疫学检测技术.pptVIP

2.B细胞功能测定 单扩 ELISA 速率比浊法测定各类免疫球蛋白含量 抗体形成细胞测定 本文档共89页；当前第62页；编辑于星期三\15点38分 （2）溶血空斑试验 原理： 本文档共89页；当前第63页；编辑于星期三\15点38分 临床应用与评价 溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响 评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。 本文档共89页；当前第64页；编辑于星期三\15点38分 　 B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法 原理： 本文档共89页；当前第65页；编辑于星期三\15点38分 应用与方法学评价： 该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。 优点： 稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。 本文档共89页；当前第66页；编辑于星期三\15点38分 ELISPOT技术简介 酶联免疫斑点试验( Enzyme linked immunospot assay) 80 年代，国外的科研工作者根据 ELISA 技术的基本原理，建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和 CK 分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）。因其具有较高的特异性和敏感性，目前正被国内外广泛应用，对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。 本文档共89页；当前第67页；编辑于星期三\15点38分 ELISPOT的基本原理 细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与酶标记（例如碱性磷酸酶）的亲和素结合。底物（BCIP/NBT，产物为蓝紫色）孵育后，PVDF 孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过 酶联斑点分析系统对斑点分析后得出结果。 本文档共89页；当前第68页；编辑于星期三\15点38分 化学发光免疫测定 吖啶酯、鲁米诺 生物发光免疫测定 萤火虫、发光水母 化学发光酶免疫测定 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 电化学发光免疫测定 本文档共89页；当前第30页；编辑于星期三\15点38分 5 )免疫胶体金技术 用胶体金标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法 本文档共89页；当前第31页；编辑于星期三\15点38分 6 )免疫印迹法（Western blotting） 该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测技术，即将电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫技术测定。 常用于检测多种蛋白质 本文档共89页；当前第32页；编辑于星期三\15点38分 免 疫 印 迹 法 示 意 图 本文档共89页；当前第33页；编辑于星期三\15点38分 本文档共89页；当前第34页；编辑于星期三\15点38分 4.蛋白质芯片技术：又称蛋白质微阵列 是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点等。 本文档共89页；当前第35页；编辑于星期三\15点38分 原理：是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等各种介质载体上成为检测的芯片，然后，用标记了有特定荧光物质的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与其对应的蛋白质结合，抗体上的荧光将指示对应的蛋白质及其表达数量。 本文档共89页；当前第36页；编辑于星期三\15点38分 第三节 免疫细胞功能的检测 本文档共89页；当前第37页；编辑于星期三\15点38分 本文档共89页；当前第38页；编辑于星期三\15点38分 免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离 本文档共89页；当前第39页；编辑于星期三\15点38分 (一)外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。 Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。 本文档共89页；当前第40页；编辑于星期三\15点38分 细胞分离基本原理 不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同 本文档共89页；当前第41页；编辑于星期三\15点38分 不同细胞密度不同 人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 本文档共89页；当前第42页；编辑于星期三\15点38分 用1.077±0.001的分层液可将细胞分离 　 本文档共89页；当前第43页；编辑