第三章-外植体的选择和灭菌课件.pptxVIP

第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 第三章 外植体的选择和灭菌 ppt课件 1 1 外植体部位 2 取材季节 3 器官的生理状态和发育年龄 4 选取适宜的大小 ppt课件 2 第一节 外植体的选择 ­ 植物体的各个部位，如茎尖、茎段、皮层及维管组织、 髓细胞、表皮、块茎的贮藏薄壁细胞、花瓣、根、叶、 子叶、 鳞茎、胚珠和花药等。 ­ 不同种类的植物以及同一植物的不同器官对诱导条件反 应不一致的 。 ­ 大多数植物来说， 茎尖是较好的部位 ，其形态已基本建 成，生长速度快，遗传性稳定，是获得无病毒苗的重要 途径。 ppt课件 3 1 外植体部位 ­ 培养材料的来源是否保证是否会引起不良变异 。 ­ 叶片的来源最有保证，许多植物的组织培养以叶 片为外植体。 ­ 对一些培养较困难的植物，可以通过子叶或下胚 轴来建立其组织培养再生体系。 外植体选择的原则 ppt课件 4 2 取材季节 p在生长开始的季节取材，若在生长末期或已进 入休眠时取样，则外植体可能对诱导反应迟钝 或无反应。 ppt课件 5 ­ 植物上部器官的生长时间虽短，其生理年龄 却较老 ，更接近发育上的成熟，越容易形成 花器官。而越向基部， 则生理年龄越小。 ­ 下部组织越易形成营养器官 ，上部组织易形 成花器官。 ­ 通常年幼组织比年老组织有较高的形态发生 能力，容易培养，有较大的再生能力。 3 器官的生理状态和发育年龄 ppt课件 6 4 选取适宜的大小 n材料太大易污染；材料太小，难于成活。 n0.5cm--1.0cm。 n如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小 ppt课件 7 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 第三章 外植体的选择和灭菌 ppt课件 8 1 外植体的灭菌方法 Ø预处理： 先对植物组织修整，去掉不需要的部分，流水中 冲洗干净。 Ø预处理的植物材料的灭菌： Ø原则： 充分灭菌，但不伤外植体 不同的外植体，灭菌的要求也不一样 ppt课件 9 2 常用灭菌药剂的使用和效果 ppt课件 10 常规的表面灭菌处理方法 ①把材料放进70%的酒精中约30s。 ②用0.1%的升汞(HgCl2) 中浸泡5-10min。 或用10%的漂白粉上清液中浸10min~ 15min。 ③无菌蒸馏水冲洗3~5次。 ④灭菌时进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好 的接触。 ⑤在灭菌剂里滴入数滴0.1%的Tween20 (吐温) 或Tween80湿润剂，则灭菌效果更好。 ppt课件 11 消毒注意事项 1)表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和 处理时间，以减少组织的死亡。 2)与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为 消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。 3)若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得 到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。 4) HgCl2 效果最好，但对实验材料的危害最大，要用水冲洗至少5次。 ppt课件 12 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 第三章 外植体的选择和灭菌 ppt课件 13 第三节 污染原因和预防措施 1、污染的原因 污染——是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生 杂菌，导致培养失败的现象。 ppt课件 14 1.1 污染的原因： ­ 从病源菌方面：主要有细菌及真菌两大类； ­ 从污染的途径： 外植体带菌 培养基 器皿灭菌不彻底 操作人员未遵守操作规程等引起的。 ppt课件