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ransws研究生物屏障 transw也被称为渗透室，它不仅是一个试验装置，也是一种试验技术。它的关键部分是渗透性膜，位于小室底。应用不同孔径和经过不同处理的滤膜，就可以进行生物屏障的建立、细胞共培养、细胞趋化、细胞迁移和细胞侵袭等多种方面的研究。在模拟生物屏障方面，研究较多较成熟的有血脑屏障、肠粘膜屏障、血视网膜屏障、胎盘屏障和腹膜透析屏障。本文着重在Transwell模拟腹膜透析屏障方面做一简要综述。 1980年，Nolph等发现腹膜屏障由毛细血管腔、内皮细胞间隙、内皮细胞间隙外屏障、间质、间皮细胞、间皮细胞浆膜侧不流动层构成。其中间皮细胞和不流动层对溶质和水的转运阻碍不明显，主要是毛细血管内皮细胞根据相对分子质量的大小决定溶质的转运效率。这通常用单层内皮细胞的“三孔模型”来表示，并且可以用其来模拟整个腹膜屏障。但是该模型缺乏间质成分，只是单纯模仿透析器的微管状结构，近来认为三孔理论很难解释腹膜屏障的病理生理变化。 所以说，理想的腹膜透析屏障是静脉内皮细胞和腹膜间皮细胞的复合体。在小室底内面种人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) ，小室底外面种人腹膜间皮细胞 (human peritoneal mesothelial cells, HPMC, 图1) 。这样可以在小室内放入腹膜透析患者的血清，小室外放腹膜透析液从而模拟血流静止状态的腹膜透析。应用此模型的实验研究已有报道，另外单层腹膜间皮细胞或静脉内皮细胞也用于研究腹膜透析，其中前者主要用于腹膜间皮细胞向纤维细胞的转分化，后者主要应用在超滤失败方面。 用Transwell模拟腹膜屏障较在人体或动物试验的优点在于模型建立相对简单，可以大批量建立；成本低，不违反伦理，可以任意更改试验条件；试验结果的检测和质量控制相对容易，干扰因素较少；研究方法相对成熟，比如屏障的通透性检测在啮齿类动物相关实验中已得到证实，即腹膜的蛋白通过率与等张液体的通过率是相同的，进而认为白蛋白和免疫球蛋白可以作为衡量腹膜屏障液体通过率的标记物。 1 膜膜分析障碍模型的具体构建方法 1.1 免疫组织试验 HUVEC的原代培养：使用M199培养基、10%胎牛血清、10%人血清和1ng/ml碱性成纤维细胞生长因子，选择2～3代HUVEC进行试验，使用荧光显微镜观察进行荆豆凝集素免疫荧光染色。HPMC的原代培养：使用M199培养基和10%胎牛血清，选择2～3代HPMC进行试验，使用相差显微镜观察进行细胞角蛋白的免疫荧光染色。本实验室经验为选择HUVEC和HPMC细胞株，两者均使用内皮细胞培养基 (Sciencell公司生产，货号为1001) ，HUVEC染色选择Ⅷ因子，HPMC染色选择细胞角蛋白。 1.2 hpmc的制备 使用Corning公司的Transwell (聚碳酸酯膜，3μm孔径，直径12mm) ，将小室底内外两侧涂抹纤连蛋白、玻连蛋白和牛血清白蛋白 (bovine serum albumin, BSA）。再将HPMC种于小室底外面，倒置小室后放于培养箱中培养，4 h后将小室正置于24孔板内培养5 d，每隔1 d换液1次。将HUVEC种植在包被纤连蛋白的小室底内面，共培养4 d后形成双层细胞模型 (图2) 。 1.3 细胞极性验证 (1) HUVEC行荆豆凝集素免疫荧光染色，HPMC行细胞角蛋白免疫荧光染色； (2) 用透射电镜观察膜两侧细胞形态和分布； (3) 使用ZO-1进行免疫荧光染色验证两种细胞的极性； (4) 使用异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC) -BSA或FITC-人血清白蛋白 (human serum albumin, HSA, 67 k Da)或FITC-右旋糖酐 (4, 10, 70, 150 kDa)验证屏障的通透性。 模型建立后，可应用此双层细胞模型 (HUVEC+HMPC) 或简易单层细胞模型 (HUVEC/HMPC) 进行腹膜通透性变化的相关实验或针对两种细胞本身宏观或微观变化的相关实验。 2 传统腹膜透析液联合葡萄糖降血药制剂 为了研究传统腹膜透析液所含葡萄糖降解产物、传统腹膜透析液及新型Icodextrin腹膜透析液对内皮细胞水孔蛋白1 (aquaporin 1, AQP1) 及内皮源一氧化氮合酶 (endothelial nitric oxide synthase, e NOS) 表达影响，Lin等将HUVEC接种于含DMEM培养液的Transwell小室中，细胞生长至接近汇合时，换用含0.1%胎牛血清的培养液使细胞同步化24h，换用新鲜含10%胎牛血清培养液。Transwell小室内加以不同的液体及对照组刺激以模拟体内的腹膜透析环境。研究发现