肿瘤体外药敏检测(完整)课件.pptxVIP

Tumor Chemosensitivity Assay 肿瘤体外药敏检测技术进展及应用 广西医科大学外科实验室 苏承武 Ø 肿瘤化疗药物敏感性试验(TCA) Tumor Chemosensitivity Assay 将肿瘤细胞进行体外的有药培养，然后通 过检测细胞活性的有关指标，判断不同药 物的疗效。通过这种试验，即可确定针对 个体肿瘤细胞具有最佳疗效的化疗药物或 药物组合。 ☆ 肿瘤化疗药物敏感性试验 是个体化治疗的基础 1.肿瘤细胞的异质性(heterogeneity) Ø 肿瘤的发生具有多阶段、多基因的特点，而同一种肿瘤的基 因特性和发生阶段都可能会有非常大的差别；表现出在形态 上和生物学功能上的极大的不同。 这种肿瘤细胞的异质性已经得到越来越清楚的认识。 肿瘤细胞的异质性主要表现在 形态异质性：病理学上的形态多种多样。 基因异质性：肿瘤的发生经历了多基因的改变， 同一种基 因可以有多个突变位点。 如P53基因的突变 位点就已发现有 2000个之多。 功能异质性：基因的异质性导致生物学功能的异质性。 左：肠型腺癌(胃) 右：弥漫型胃癌 2.临床与个体化治疗 Ø 化疗作为全身性治疗的手段，在恶性肿瘤的治疗中 具有不可替代的地位。 Ø 同种肿瘤对化疗药物具有不同的反应性，忽视个体 差异仅凭经验式化疗存在盲目性，使得总体疗效不 佳。尤其对实体瘤，经验化疗的疗效仅为20％左右。 感药物，以进行针对性较强的个体化治疗；是否进 传统化疗和ATP-TCA指导的化疗的 生存率比较 引自Kurbacher CM, Cree IA, Brucker. Anticancer Drugs. 1998, 9: 51-57 0 50 100 150 200 250 0 p = 0,0016 传统化疗(n = 17) ATP-TCA指导的化疗 (n = 39) p = 0,0009 Progression free Survival ATP-TCA指导的化疗 (n = 39) 100 80 60 40 20 100 80 60 40 20 50 100 150 200 % Patients % Patients 传统化疗(n = 17) Overall Survival Weeks Weeks 250 0 0 ☆ 肿瘤化疗药敏方法发展及简介 Ø 化学治疗是肿瘤的三大治疗手段之一。近 30年来，虽然 某些恶性肿瘤的化学治疗有明显改善，但多数肿瘤，特别是 实体瘤疗效仍不理想。这与肿瘤存在个体差异性，以及多重 耐药性 (MDR) 等因素有关。 Ø 因此如何选择有效药物，进行有的放矢的治疗早已成为 化疗界所关注的问题。 Ø 早在上世纪60年代已有报告，用卵巢癌组织进行药敏检 测，该组病人中位生存期有明显延长。化疗药敏检测已发展 成为体外 ( in vitro) 与体内 ( in vivo) 两类， 成为“当今 癌症研究的主攻课题”之一。 一、体外药敏检测 理想的药敏检测方法应该具备的条件 1. 操作简便，可以标准化，便于推广 2. 标本可评价率高 3. 检测敏感、可靠、客观 4. 临床相关性 ( 一) 瘤细胞直接损害试验 Ø 新鲜肿瘤标本制成单细胞悬液，与抗癌药接触1 ~数小时后，洗去抗癌药，加入染色剂，与未 加药对照样本比较，可从瘤细胞的杀伤比例判 断药物抗肿瘤效应。根据染色剂与观察指标的 不同，可分为：美兰法、伊红台盼蓝法、吖啶 橙荧光测定法、同位素释放法等。上述试验周 期短、成本低、方法简便，但准确性差，现已 少用或仅作为细胞存活与否的判断方法。 Ø 体外药敏预测一般采用短期原代培养。在无菌条件下，用机 械法和／或酶消化法，将新鲜肿瘤标本分离为组织块、细胞 团或分散的单个细胞 (视瘤组织多寡及所用培养方法而定) ， 与各种抗癌药分别作用一定时间后，与对照组比较，可计算 用药组的瘤细胞杀伤比例，测出抗癌药物敏感度。 (二) 原代瘤细胞培养 存在问题 标本可评价率低，仅有40~70％。 实验周期长，需要2周以上 测试药物种类和数量有限 操作繁琐，难以标准化 阳性预测值较低，仅有40~60％ 敏感性较差，最低仅能检测500个细胞 量程较小，有效量程在2.0以内 主要的原代瘤细胞培养药敏检测方法 及其存在的问题 胸腺嘧啶核苷 掺入法 (3 H- TdR) 四唑蓝比色法 (MTT) 细胞毒性差异染 色法 (DiSC) 集落形成法 ( HTCA) 药敏检测方法 原代瘤细胞培养药敏检测方法的几点提示 Ø 本类方法在与其他学科的结