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模拟暖冬对棚外和棚内白三叶生长的影响 根据一些研究，冬季作物无法避免抗冻试验，冬季作物的抗冻能力有所降低。然而，在春天的“落春寒”中，生长受阻，产量下降。因此暖冬和春季“倒春寒”已成为影响植物生长发育、威胁冬小麦产量和分布的重要限制因子,这已受到世界农业科学家的关注。而白三叶是一种喜温暖湿润气候,抗逆性较强的植物,冬季可在-40 ℃低温条件下安全越冬。同时白三叶具有很长的保绿期,在沈阳可达230 d左右,而成为目前广为应用的园林绿化种,在我国生态园林建设中起重要作用。虽然白三叶对季节性冬季冷冻具有很强的抵抗能力,但白三叶是否能应对未来暖冬非节律性变温引起的融冻型冻害而维持生存,及其维持生存的生理调控机制尚不清楚。而培育抗逆性更强的白三叶新品种是稳定生态园林、延长草坪寿命、减少建设投资的重要举措。而揭示白三叶抵御极端天气的生理生态幅和对未来暖冬引起的融冻型的适应机制则是抗冻育种的关键。 对白三叶抗冻生理机理研究发现,随着温度降低白三叶叶片电导率和MDA均呈升高趋势,SOD活性急剧增加。随着低温时间的延长和低温程度的加重,白三叶品种MDA积累速度也快速增加,但抗寒性强的品种比抗寒性弱的品种含量低。并且当温度降到-5 ℃时,叶片内SOD和POD两种保护酶活性会急剧升高,清除活性氧自由基,从而避免细胞膜伤害]。在低温胁迫下,白三叶叶片中脯氨酸含量也随着温度的下降而急剧上升。在冰冻过程中,白三叶根部的蔗糖和脯氨酸含量都提高,对细胞进行渗透调节使细胞免受低温伤害。白三叶叶片、根和匍匐茎会积累大量的淀粉和可溶性糖,以抵抗冬季冷冻胁迫,维持自身生长的需要。 目前对白三叶抗冻力研究多是在人工控温条件下进行。这种采用短时快速降温的方法虽然可以了解白三叶对非节律性变温的响应,但很难真实的反应出白三叶对自然节律性温变的生理适应机理。 因此, 本文通过对烟台地区生长的白三叶,采用在冬季自然环境条件下搭建塑料大棚模拟暖冬的方法,通过在建棚前、建棚后、冬季融冻胁迫、春季揭棚后和“倒春寒”过程中,对白三叶植株高度、叶片细胞膜透性、MDA含量、抗氧化酶活力(SOD、POD、CAT)、渗透调节物含量(脯氨酸、可溶性糖)的分析,揭示冬季高温对白三叶越冬和适应春季“倒春寒”的影响,以及其抗冻和对春季“倒春寒”适应的生理调控机制。 1 材料和方法 1.1 年—试验区自然状况 试验在烟台市芝罘区鲁东大学校园绿化带上进行。鲁东大学地处东经119°34′—121°57′,北纬36°16′—38°23′,位于山东半岛东部。年平均气温11.8 ℃,最热月为8月(24.6℃),历年极端最高气温38.4 ℃。最冷月为1月,月平均气温 -1.5 ℃,历年极端最低气温-13.8 ℃;冬季降雪频繁,地面常有积雪,最低气温-10 ℃左右。秋分过后,昼夜温差逐渐加大,幅度高于10 ℃以上,全年无霜期210d。 1.2 试验处理与气温分析 试验于2009年冬季和2010年春季实施,试验材料取自位于鲁东大学校园内一个绿化带,该绿化带于2006年建植。在绿化带上选取生长均匀的地块为样地,试验前将样地围起来做标记以保证试验期间不被干扰,同时剔除生长过弱和过强的白三叶及杂草以确保试验材料均匀一致。将选好的白三叶草地划分为两部分,一部分在自然条件下生长(低温处理-对照), 另一部分白三叶草地用塑料布搭建大棚罩起来营造高温(高温处理-暖冬)。 搭棚: 2009年入冬日平均气温在零度以上变化(最高温/最低温 8 ℃/2 ℃),进入12月后,尤其在12月中旬以后,日均温降到接近零度(3 ℃/ -2 ℃),并且在12月18日(-4 ℃/ -6 ℃),12月27日(0 ℃/ -4 ℃)和1月5日(- 4 ℃/ -9 ℃)出现降雪,气温急剧下降,日最高温度降到零度以下。整个冬季气温呈波动式下降趋势,最高温度达13 ℃,最低温度-10 ℃(图1)。监测数据显示气温在11月底开始大幅度下降,因此试验处理选在11月30日,对样地白三叶一部分进行高温搭棚处理,以期达到模拟暖冬的效果。 揭棚:2010年春季(3月份)气温开始回升,最高气温15 ℃,最低气温-6 ℃,气温呈波动式上升。随3月17日降雪,最低气温降至零度以下(7 ℃/ -1 ℃),出现“倒春寒”现象。4月份气温明显回升,日最低温在0℃以上。为了让暖冬中生长的白三叶经历春季“倒春寒”, 试验在3月11日给暖冬处理的白三叶揭棚。 1.3 采样和实验方法 1.3.1 季我国叶片采集时间 为了能检测白三叶在冬季融冻-冻融胁迫和春季“倒春寒”过程中叶片的生理变化。叶片样品的采集时间安排在冬季下雪前后和春季揭棚前后及春季“倒春寒”时期。叶片采集时间均在8:00进行。随机从白三叶种群中用尖刀减取植株中上部叶片,然后将叶片分为两组,一组用锡箔纸将叶片包裹立即放入液氮中固定,然