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流式细胞仪检测细胞周期原理和方法 高考和模拟试题中经常会出现流式细胞仪检测细胞周期图像，那么， 什么是流式细胞仪？如何检测细胞周期？ 流式细胞仪是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分 析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个 细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度 高.准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 流式细胞仪，乂称荧光激活的细胞分选器，作为进行流式细胞分析的 仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体力学、图像技 术、细胞生物学、免疫学理论于一体，是一种非常先进的检测仪器， 被誉为生物医学实验室的“CT”。 流式细胞术巳经成为一种用途最广泛和最先进的细胞分析技术，在细 胞生物学、血液学、肿瘤学、免疫学等基础和临床医学领域发挥着重 要作用。 流式细胞讣的基本结构流犬细胞计主要山流动室与液流系统、激光源 与光学系统、光电管与检测系统、计?算机与分析系统四部分组成（如 ?分光的向第散射尤检测言舌植 滴充Mi ?分光 的向第散射尤检测言舌植 滴充Mi信号 ??＞电 正电荷偏 典例分析 （2015年北京高考试题）流式细胞仪可根据细胞中DNA含量的不同 对细胞分别计数。研究者用某抗癌药物处理体外培养的癌细胞，24 小时后用流武细胞仪检测，结果如图。对检测结果的分析错误的是 A - b峰中细胞的DNA含量是a峰中的2倍 B - a峰和b峰之间的细胞正进行DNA复制 C.处于分裂期的细胞均被计数在Q峰中 D -此抗癌药物抑制了癌细胞DNA的复制 【答案】C 【解析】从题目图中我们不难看出有两个峰值细胞的数U最多，分别 对应的DNA含量为40和80。可知40的应该是处于分裂间期的G1 期细胞，G1期时间比较长。而80的细胞应该是属于62期和分裂期 的细胞，DNA含量巳经加倍。因此A选项中b峰中细胞的DNA含 量是a峰中的2倍是正确的。B选项中a峰和b峰之间应该是细胞周 期中的S期，正在进行DNA分子复制。C选项中，处于分裂期的细 胞DNA含量处于加倍状态，应该i |?数在b峰中。D选项通过看右侧 图可知b峰明显下降，可知应该是抑制了 DNA分子的复制，DNA 加倍的细胞明显减少，所以D选项正确。 流式细胞仪的检测细胞周期的原理（PI染色法） 细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，细胞 的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶 段。间期乂分为三期：即DNA合成前期（GI期）、 DNA合成期（SKID DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结 束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（GO 山于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ GO期具 有二倍体细胞的DNA含量（2N）.而G2/M期具有四倍体细胞的 DNA含量V4N），而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。 PI可以打DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA禽量。因 此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期 各时相区分为G1/G0期，S期和G2/M期，获得的流式直方图对应的各细胞周期 可通过特殊软件计算各时相的细胞口分率。 sw OS- OON sw OS- OON ■ 1… (toChaocets PL即碘化内?锭9可以与细胞内DNA和RNA结合。PI不能通过细胞 膜完整的细胞（如活细胞和早期凋亡细胞），在标本制备时，必须先用乙醇或其 他破膜剂增强细胞膜的通透性，才能使？【进入细胞内与细胞内的核酸结合。乙 醇通常为终浓度为70 %的冷乙醇。 如果应用于流式，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通过流式细胞术 检测到的与 DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。当然，PI也可用 于作细胞核染色，作为观察或定量细胞的方法。 流式细胞仪的工作原理 首先将待测细胞被制成单细胞悬液，经特异性荧光染料染色（间接免疫荧光染色 或直接免疫荧光染色）后加入样品管中，在气体压力推动下进 入流动室，流动室内充满鞘液，在鞘液的作用下，细胞排成单列从流动 室喷嘴口 喷出，并被鞘液包绕形成细胞液柱。这种同轴流动的设计，使得样品流和鞘液流 形成的流束始终保持着一种分层鞘流的状态。 鞘液和样品流组成一个圆形的流束，一起自喷嘴的圆形宝石孔喷射出 来，进入流 动室，与水平方向的激光光束垂直相交，该区称为测量区。 利用样品流和鞘流的气压差的层流原理，使细胞依次排列成单行，每个细胞以均 等的时间依次通过测量区，被荧光染料染色的细胞受到强烈的 激光照射后发出荧 光，同时产生散射光。 细胞发出的荧光信号和散射光信号，同时被荧光光电倍增管接收，被积 分放大反 转换为电子信号，再经过信号放大、加工处理后存储于计算机