流式细胞仪简介.docxVIP

流式细胞仪 一、结构技术特点（4个方面）： （1） 流动室和液流系统 （2） 激光源和光路系统 （3） 光电管和信号测量及计算机分析系统 （4） 细胞分选系统 流式细胞计是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在 液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的 参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能 测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或 蛋白的多少。也就是说，它的细节分辨率为零。 流式细胞计的基本结构 二、原理: -?荧光检测器样品管…喷嘴……FACS电子控制台 -?荧光检测器 样品管… 喷嘴… …FACS电子控制台 流动室- 分光镜 集光器 前向角散射光检测器 液滴充电信号 激光束：正电荷偏转板- -负电荷偏转板 流式细胞仪示意图 1、 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。 2、 用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出， 鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一 个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。 3、 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上， 被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。 4、 这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。 5、 光散射信号在前向小角度进行检测，光散射信号基本上反映了细胞体积的大小； 6、 荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离， 形成多个不同波长的荧光信号。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或 其核内物质的浓度， 7、 经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为 可被计算机识别的数字信号。 8、 计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上， 液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。 9、 检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形 式表达，其X轴为测量强度，丫轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512 或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独 显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。 10、 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个 超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液 滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电 场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现 细胞的分离。 三、主要应用 目前，广泛应用于个体发育、胞移植实验室，用于决定PBSC采集的时机及评价外周血 采集液的收益。其基本原理为荧光免疫分析，即根据外周血与骨髓中HPC表达同样的CD34 抗原(CD34+)，并利用荧光标记CD34抗体与HPC膜表面CD34抗原结合，在特定波长的激光 照射下，检测CD34+胞发出的荧光强度并结合其光学特性，即较低的侧向散射(SSC)和较 高的前向散射(FSC)，从而检测CD34+细胞。CD34+细胞实际上包括所有的HPC，如CFU-GM， 红细胞暴发形成单位(BFU-E),巨核细胞形成单位(CFU-Mk),混合细胞集落形成单位(CFU-Mix) 和原始细胞集落形成单位(CFU-Blast)。后两种HPC明显具有许多干细胞的特征，如它们可 以自我更新，也可定向分化为一定数目的造血细胞系。体内试验也发现，经过致死剂量照射 的狒狒移植足够数量的自体CD34+细胞，可以完全恢复其造血功能，同样的现象也可在经过 骨髓、摧毁性治疗的病人中出现。有人认为，CD34+细胞在功能上可根据是否表达CD33抗 原而分为2个细胞群。早期的HPC，如CFU-Blast和LTC-IC仅表达Q CD34抗原(CD34+/CD33-)， 而较为成熟的定向祖细胞可同时表达CD34和CD33抗原(CD34+/CD33+)。还有人根据CD38 抗原表达与否，将CD34+细胞分为CD34+/CD38-和 CD34+/CD38+两个亚型，并且认为LTC-IC 主要分布于CD34+/CD38-亚型，而更为原始的ELTC-IC则仅分布于CD34+/CD28-细胞群，说明 CD34+/CD38-亚型性质上更接近PBSC。 回顾性资料表面，移植经历了与移植物中不同分化程度的HPC有关的两个阶段。起初， 与早期造血恢复有关的是移植物中定向