蛋白质检测方法.pptVIP

溴酚蓝 四羧基苯基卟啉 Evans blue 本文档共41页；当前第24页；编辑于星期三\17点52分 偶氮染料 方酸菁染料 酞菁染料 本文档共41页；当前第25页；编辑于星期三\17点52分 基于AIE机理检测蛋白质 此外，小分子荧光探针还可基于荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET),光诱导电子转移 (photo-induced electron transfer PET）, 分子内电荷转移( Intramolecular charge transfer , ICT)等效应对蛋白质进行选择性识别 本文档共41页；当前第26页；编辑于星期三\17点52分 基于自组装机理检测蛋白质 超分子化学：分子聚集体结构和功能为研究对象, 旨在研究分子基于弱相互作用的组装、自组装和自组织行为,并研究这些行为可能带来的结构和功能的改变,以期建立结构和功能之间的关系。超分子的组装的实现依赖于分子间键. 它包括氢键、范德华力、亲脂-疏水作用、金属离子的配位键、π-π堆积作用等 Palapuravan Anees, et al. J. Am. Chem. Soc. 2014, 136,13233?13239 本文档共41页；当前第27页；编辑于星期三\17点52分 比色/比率型荧光探针检测蛋白质 利用催化消除氨基甲酸酯保护基团合成了反应型探针，BSA的存在使得氨基萘二甲酰亚胺的绿色荧光增强，根据溶液颜色变化和荧光强度比值识别并定量检测。 X. Zhang. et al. Analyst, 2011,136(19):4008-4012. 本文档共41页；当前第28页；编辑于星期三\17点52分 基于荧光有机纳米材料检测蛋白质 纳米材料，是指在三维空间中至少有一维处于纳米尺度范围（＜100 nm）或由该尺度范围的物质作为基本单元构成的材料。纳米材料的特殊结构，使其具有不同于常规材料和单个分子的一些特性，主要包括比表面积大、高化学活性、特殊的光、电、磁性质等。而荧光纳米材料，由于其特殊的结构与光学特性，为化学、物理、医学和生物领域的发展带来了新的机遇。 本文档共41页；当前第29页；编辑于星期三\17点52分 本文档共41页；当前第1页；编辑于星期三\17点52分 Contents 1、蛋白质简介 2、蛋白质的检测方法 3、蛋白质与疾病的关系 本文档共41页；当前第2页；编辑于星期三\17点52分 蛋白质简介 蛋白质是由氨基酸脱水缩合形成的空间结构复杂的大分子有机物，其主要化学元素为 C（约 50%）、O（约23%）、N（约16%）、H（约7%）、S（约 0~3%）。氨基酸是蛋白质的基本组成单位，蛋白质既具有氨基酸的部分理化特性，也具有其它有机物的一些共性以及众多的自身独有特点与性质： 高分子、两性解离及等电点、水合作用、变性作用、显色反应（双缩脲反应、Folin-酚反应、茚三酮反应、米伦反应、黄蛋白反应、乙醛酸反应、坂口反应、偶氮反应、考马斯亮蓝反应、氨基酸的α-氨基及α-羧基反应、） 蛋白质的异常表达与体内多种疾病的发生发展息息相关 本文档共41页；当前第3页；编辑于星期三\17点52分 蛋白质的检测方法 传统蛋白质检测方法：免疫印迹法；酶联免疫吸附试验 常规方法： 物理法：紫外吸收法 化学法：凯氏定氮法；比色法 高效液相色谱法 毛细管凝胶电泳法 近红外光谱法 质谱法 荧光法 本文档共41页；当前第4页；编辑于星期三\17点52分 免疫印迹法（ Western blot） 原理：蛋白样品经过电泳分离后，转移并固定于膜上，然后应用抗原抗体反应进行特异性检测的方法。 Western 杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定相结合的特异性蛋白质的检测方法 免疫印迹法是检测蛋白质混合溶液中某种特定目的蛋白的定性方法，也可以作为确定同一种蛋白质在不同细胞或同一种细胞在不同条件下的相对含量的半定量方法。 本文档共41页；当前第5页；编辑于星期三\17点52分 免疫印迹法检测样品中特异蛋白质的基本流程 样品的凝胶电泳 蛋白印迹 封闭反应 与特异性抗体（一抗）孵育 与酶耦联的二抗孵育 显色或化学发光显影 观察和记录结果 本文档共41页；当前第6页；编辑于星期三\17点52分 酶联免疫吸附试验 原理：酶联免疫吸附试验（ enzyme linked immunosorbant assay，ELISA）是一种固相免疫测定技术，先将已知的抗原或抗体包被到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。测定时，将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面