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第八节、微生物的培养 －－微生物培养中的氧气条件 培养设备：包括接种室、恒温培养室、恒温培养箱、液体发酵——摇床、厌氧培养罐等。 好氧培养：例如平板培养、斜面培养、浅层液体培养、液体振荡培养或通气搅拌培养等都属于好氧培养的方法。 厌氧培养：除了最简便的深层液体培养以外，可以采用物理、化学或生物学的方法来排除培养容器中的空气或空气中的氧气，创造厌氧条件。对于严格厌氧的微生物，要用化学和物理并用的方法。在进行厌氧培养时，可以用指示剂检查系统中的还原条件，一般实验室中常用的如葡萄糖——美兰指示剂。 本文档共148页；当前第94页；编辑于星期二\8点6分 微生物的培养 －－微生物培养中的厌氧条件 生物学方法：利用植物呼吸作用，造成厌氧条件，常用的方法是在密封的干燥器底部放入发芽种子，因种子的呼吸作用增强，吸收氧气，创造厌氧条件。此法简易，但厌氧程度低。 化学方法：利用焦性没食子酸吸收容器中的氧气。在容器的一边放一包用吸水紙包好的焦性没食子酸，在另一边放入碱液，容器密封后，让碱液流向焦性没食子酸一边，两者反应时吸收容器中的氧气，创造厌氧条件。 物理方法：常用真空泵抽出密封干燥器内的空气或再充入其它惰性气体，以保证厌氧条件。抽气前，容器内放入指示剂和培养物。一般为达到严格厌氧目的，常采用物理和化学相结合并用的方法。 本文档共148页；当前第95页；编辑于星期二\8点6分 微生物的培养 －－微生物培养中的厌氧培养 美兰氧化还原指示剂：0.006N NaOH 0.015% 美兰溶液 6％ 葡萄糖溶液 上列三种溶液在使用时等量混合，加热使美兰退色，迅速放入厌氧罐中。 本文档共148页；当前第96页；编辑于星期二\8点6分 第九节、微生物细胞大小和数量的测定 目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法； 血球记数板测定微生物数量的方法。 本文档共148页；当前第97页；编辑于星期二\8点6分 测定微生物的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 本文档共148页；当前第98页；编辑于星期二\8点6分 测定微生物的大小 目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以可得： 目镜测微尺每格长度（μm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数 注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情况下才可重复使用。 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。 本文档共148页；当前第99页；编辑于星期二\8点6分 测定微生物数量 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 本文档共148页；当前第100页；编辑于星期二\8点6分 测定微生物数量 本实验用血球计数板计数酵母菌的数量 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。 高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 计算方法： 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底