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细胞工程单克隆抗体详解演示文稿 本文档共32页；当前第1页；编辑于星期二\5点23分 （优选）细胞工程单克隆抗体 本文档共32页；当前第2页；编辑于星期二\5点23分 本文档共32页；当前第3页；编辑于星期二\5点23分 本文档共32页；当前第4页；编辑于星期二\5点23分 本文档共32页；当前第5页；编辑于星期二\5点23分 只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体。 本文档共32页；当前第6页；编辑于星期二\5点23分 单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞(myeloma cell)与经特定抗源免疫刺激的B淋巴细胞(antigen stimulated B lymphoblast)融合得到杂交瘤细胞(hybridoma cell)，杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。因此，单克隆抗体技术又称为杂交瘤技术(hybridoma technology ）。 本文档共32页；当前第7页；编辑于星期二\5点23分 Niels K. Jerne G. Kohler C. Milstein 本文档共32页；当前第8页；编辑于星期二\5点23分 1975年， 英国剑桥大学学者Kohler 和Milstein将小鼠骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫后的小鼠脾细胞进行融合，形成既能产生抗绵羊红细胞抗体、又能进行分裂繁殖的杂交瘤细胞，创立了杂交瘤抗体技术，获1984年Nobel奖。 1984年通过基因工程技术，初次建立了人-鼠杂交瘤。 1987年单抗制剂开始用于临床试验。 单抗技术，解决了抗体不纯的问题，标志着抗体制备从机体水平进入了细胞水平。由此而建立的单链抗体库技术和噬菌体抗体库技术等，则使抗体制备技术迈进分子水平。 一、原理与概念 本文档共32页；当前第9页；编辑于星期二\5点23分 杂交瘤技术基本原理 哺乳动物的免疫系统包括体液免疫和细胞免疫，参与这两种免疫反应的细胞有： B淋巴细胞和T淋巴细胞。 B淋巴细胞，进一步发育成浆细胞，浆细胞能产生抗体，抗体参与体液免疫。 T淋巴细胞，进一步发育成吞噬细胞，直接参与细胞免疫。 T细胞不能产生抗体，但可以帮助B细胞产生抗体。 正常的B淋巴细胞不能在体外培养条件下长期生存，因而不能在体外持续产生抗体。而骨髓瘤细胞可以在体外快速生长，但不能分泌抗体。 本文档共32页；当前第10页；编辑于星期二\5点23分 克隆选择学说 作为抗体生成理论的克隆选择学说是杂交瘤技术产生的理论依据，细胞融合技术和杂交细胞的选择方法是杂交瘤技术产生的技术基础。 克隆选择学说　1957年Burnet提出的克隆选择学说认为：每一个B淋巴细胞有一个独特的受体(现在认为一个B淋巴细胞有结构相同的10万个受体)，抗原进入机体后只刺激具有相应受体的B淋巴细胞，产生与受体特异性相同的抗体分子。一个淋巴细胞只产生一种抗体分子。因此，根据克隆选择学说，一个B淋巴细胞克隆只能产生一种抗体分子。这就是生产单克隆抗体的理论依据。 本文档共32页；当前第11页；编辑于星期二\5点23分 单克隆抗体与多克隆抗体 单克隆抗体与多克隆抗体的本质区别　 单克隆抗体是源于一个B淋巴细胞的杂交瘤细胞系所分泌的针对抗原的同一表位的抗体； 而多克隆抗体(简称多抗)是由免疫动物的无数不同的B淋巴细胞分泌的针对抗原不同表位的性质各异的混合抗体。 单抗是同质的，多抗是异质的。 本文档共32页；当前第12页；编辑于星期二\5点23分 二、杂交瘤技术的基本原理 本文档共32页；当前第13页；编辑于星期二\5点23分 三、杂交瘤细胞的制备 （一）骨髓瘤细胞选择及选择性培养基 骨髓瘤细胞本身不能分泌抗体 选择次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶缺陷型（HGPRT-） 胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-） 本文档共32页；当前第14页；编辑于星期二\5点23分 HAT培养基 次黄嘌呤（hypoxanthine，H） 氨基喋呤（aminopterin， A） 胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidine， T） 次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶缺陷型（HGPRT-） 胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-） 本文档共32页；当前第15页；编辑于星期二\5点23分 （二）免疫小鼠 免疫程序是：取6~8周龄Balb／C雌鼠，基础免疫2周，静脉再加强免疫一次，3~5天后用于融合。 免疫时是否采用佐剂和事先处理抗原，要依抗原性的强弱而定。一般来讲可溶性抗原用完全佐剂效果较好。抗原量同样与抗原强弱有关，以IgG为例，第一次为l00?g，第二次为50?g，免疫途径第一次可经腹腔注射。对于细胞性抗原不用佐剂，每次腹腔注射1×l06