三七总皂苷对非酒精性脂肪性肝病大鼠的保护作用.docxVIP

三七总皂苷对非酒精性脂肪性肝病大鼠的保护作用 非酒精肝脏疾病（nafd）是一种无过度饮酒经验的临床病理综合征，具有喝酒前后乙醇含量为140g/周（女性）70g/周），以肝实质细胞脂肪变和脂肪积聚为特征的临床病理综合征。随着大众饮食习惯、生活环境的改变,NAFLD患病率逐渐增高,并成为危害人类健康的三大肝病之一。本病发病机制目前尚未完全清楚,临床上缺乏理想的治疗药物。近年来三七治疗肝炎、肝纤维化及肝硬化等多种肝病取得了较好的疗效。有关药理学研究表明,三七可止血、降血脂、抗血栓、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤、消除氧自由基、抗氧化。三七的主要活性成分为三七总皂苷(total saponins of panax notog-neseng,tPNS),故本研究提出假说,“tPNS具有改善肝功能、治疗NAFLD的作用”。本实验拟用高脂饲料诱导NAFLD大鼠模型,再给予tPNS干预,观察其对高脂饲料喂养的大鼠肝脏的保护作用,并从tPNS对NAFLD模型大鼠血脂、肝功能的影响探讨其可能的作用机制。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠50只,体重(160±20) g,SPF级,由解放军军事医学科学院实验动物中心提供(合格证号:SCXK-(军)2007-004)。 1.1.2 标准饲料及试剂 tPNS购于南京泽朗医药科技有限公司,产品纯度≥95%(Z)。双环醇购于首都医科大学附属北京中医医院(国药准字批号111210)。高脂饲料由军事医学科学院配制提供(高脂饲料配制:10%猪油+2%胆固醇+88%标准饲料)。三酰甘油(TG)液体试剂盒(酶试剂法,上海申能一德赛诊断技术有限公司);总胆固醇(TC)液体试剂盒(酶试剂法,上海申能一德赛诊断技术有限公司)。 1.2 方法 1.2.1 实验动物的饲养 SD大鼠称重后分笼喂养,标号,饲养于军事医学科学院实验动物中心。正常喂养1周后,随机分为5组,每组10只。正常对照(A)组以标准饲料喂养,模型(M)组、三七总皂苷大剂量(C1)组、三七总皂苷小剂量(C2)组、双环醇(D)组,均用高脂饲料喂养,喂养期间,实验动物自由饮水和进食,动物房保持安静,自然采光,温度25℃左右。喂养持续10周后称重。 1.2.2 组总皂苷混悬液灌胃4周 第11周开始,A、M组予以0.9%氯化钠灌胃,5 ml/次,C1、C2组分别以160 mg/(kg·d)、80 mg/(kg·d)三七总皂苷混悬液灌胃,D组以100 mg/(kg·d)双环醇灌胃。持续4周。药物剂量来源依据文献报道进行换算。 1.2.3 体脂比及内脏脂肪比 给药4周后当晚大鼠禁食不禁水12 h,次日上午称重,用10%戊巴比妥钠以0.35 ml/100 g浓度腹腔注射麻醉,腹主动脉取血8 ml,4℃,3 000 r/min离心10 min,分离血清,-20℃保存。迅速提取肝脏,称重,计算体脂比:体脂比={[副睾脂肪重量(g)+肾周脂肪重量(g)]/体重(g)}×100%;Lee’s指数(肥胖评定指数)公式:Lee’s指数=体重(g)????√×103/=体重(g)×103/体长(cm),体长为鼻肛身长;内脏脂肪比=副睾脂肪重(g)+肾周脂肪(g)/体重(g)×100%;4 ℃ 0.9%氯化钠冲洗,在肝右叶离边缘1 cm处,横切1块肝组织用10%中性甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,苏木精-伊红染色。 1.2.4 测试指标 肝脏大体性状,光镜下病理切片观察;血脂、肝功能检测采用全自动化分析仪。 1.3 统计处理方法 应用SPSS 15.0软件进行单因素方差统计分析(ANOVA),以xˉ±sxˉ±s表示。 2 结果 2.1 治疗前后不同时期大鼠的体重比较 2.1.1 治疗前不同时期1、3、5、7和10周小鼠体重的比较 结果见表1。 2.1.2 治疗后不同时期11、12和14周各组大鼠体重的比较 结果见表2。 2.2 大鼠肝脏组织病理学检测 A组大鼠肝脏包膜光滑完整,表面颜色暗红,光润,中等硬度,边缘锐利,切面细颗粒感,无油腻感。M组大鼠肝脏表面均发黄,肝脏体积明显增大,包膜紧张。C1组肝脏较A组偏大,但比M组明显减小,大部分颜色暗红、润泽,切面无油腻感。C2组肝脏普遍增大,色淡黄,切面油腻感。D组肝脏较A组偏大,较M组明显减小,色暗红,切面无油腻感。 2.3 各组lees指数、肝湿重、肝体重和内脏脂肪的比较 结果见表3。 2.4 各组肝脏病理观察 结果见图1。 2.5 各组大鼠的血脂水平和肝功能的比较 结果见表4。 2.6 组血清p0.05,2.1 D组有一只大鼠因第一次药物干预时,操作不当损伤大鼠食管而导致死亡。其余各组无不良反应。 与A组比较,1)P0.05,2)P0.01。 与A组比较,2)P0.01;