薄层色谱课件.pptxVIP

薄层色谱 实验原理 利用混合物中各组份的物理化学性质的差别,在层析过程 中,在不相溶的两个相中分布的不同,达到分离目的。 两个相 :一个是涂布在薄层板上的吸附剂, 叫固定相(吸 附剂最常用的是氧化铝和硅胶) ,另一个是在展开过程中流 过固定相的展开剂(有机溶剂), 叫流动相。 由于吸附剂对混合物中不同物质的吸附力不同,对极性大 的物质吸附力强,对极性小的物质吸附力弱 。 因此当溶剂流过 时,不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附 、解吸 附 、再吸附 、再解吸附。 易被吸附的物质相对移动较慢,在薄层板上移动的距离就 小 ;反之,较难被吸附的物质相对移动较快一些,在薄层板上移 动的距离则大。 经过一段时间的展开,混合物中各组份在薄层板上连续不断 地进行吸附和解吸附过程,从而使各组份移动的速度产生差异, 不同物质就被相互被分开,最后形成互相分离的斑点。 薄层色谱法优点 1、 展开时间短 ; 2、 分离能力强,斑点集中 ; 3、 灵敏度高,几至几十微克的物质即可被检出 ; 4、显色方便,可直截了当喷洒腐蚀性的显色剂 5、所用仪器简单,操作方便,能够普及 ; 6、薄层板价格低廉,一块板可同时检测多个样品 ; 7、色谱直观性强。 薄层色谱法的应用 1、 用于药品和制剂的质量控制及杂质检查 2、 控制化学反应进程,反应副产物的检查 及中间体的分析 3、 探究柱色谱的分离条件 4、 精制和制备纯品的药物 5、 临床和生化检验 6、 毒物分析 7、 中药成分分析和含量测定 8、 中药材品种真伪检查及其代用品寻找 9、其它微量鉴定和分析 顺 、反偶氮苯异构体进行分离 、分析 反式偶氮苯在光照下吸收紫外光形成活化分子 。活化分子失 去过量的能量返回顺式或反式基态,得到顺式和反式异构体。 反式偶氮苯的偶极矩为0,顺式偶氮苯的偶极矩为3 、0D,利用 两者极性不同把它们分离。 经过薄层层析后,没有经过光照的偶氮苯在薄层板上只有一个 斑点,而经过光照的偶氮苯有两个斑点。 在薄板上混合物的各个组分 上升的高度与展开剂上升的 前沿之比称为该化合物的比 移值,用Rf表示。 色斑 起始线 比移值 薄层色谱示意图 前沿线 实 验 装 置 实验步骤 1. 薄层板的制备与活化 将1、5g硅胶G在搅拌下加入到盛有5ml去离子水的小烧杯中, 调成有粘稠度的浆料(5-10min)马上倒在玻璃板上,用手指夹住 两边,沿水平方向轻轻振荡,使浆状物表面光滑且均匀地附在载 玻片上,水平放置 。用同样的方法再制一块 。要求薄层板的厚度 为0、25mm。 将薄层板于室温下在水平台上晾干,置于105℃-110℃ 烘箱中 活化30分钟,贮于干燥器中冷却备用。 在薄板一端1cm处用笔轻轻画一横线作为起点线,用内径 为1mm,管口平整的毛细管垂直点在起点线上 。注意动作 要轻,毛细管口不要碰到吸附剂。 假如溶液过稀,一次点样后样品量过少,可在前一次点样 干燥后,在原处再点 。 点样的直径不要超过2mm 。 因为斑 点过大,会造成拖尾、扩散,影响分离效果。 假如需要点多个样,点之间距离不小于1～1 、5cm。 2 、 点样 3 、展开 薄层色谱的展开是在密闭容器中进行的。 将展开剂(6mL环己烷和2mL苯的混合物)倒入层析缸中,待层 析缸中充满溶剂蒸气后,将点好样的层析板放入缸中展开。 点样的位置必须在展开剂液面之上 。 当展开剂展开至距顶 端0 、5～1cm时,取出层析板用铅笔画出溶剂前沿位置,晾干。 4 、计算 Rf 前沿线 色斑 起始线 薄层色谱示意图 常用的显色手段 :紫外灯,显色剂如碘 、硫酸等 样品Y 样品X 板1 Rf 板2 Rf 平均 Rf 实验结果 4 、划线点样 :在活化好的板上离底部约1cm的地方 轻轻的划一条线,用毛细管在线上点一个已知样和 一个未知样,样品圈不能大于2mm、 5 、将点好样的板放入层析缸,展开,在展开剂离顶部 1cm 的时刻取出,用铅笔画出前沿的位置,并划出 斑点的位置。 6 、在另一块板上重复一次实验。 7 、计算顺反偶氮苯的的比移值,并确定哪个斑点是 顺式偶氮苯。 注意事项 1、层析缸不要洗,废液要倒入废液缸 2、薄板要放平。 3、注意观察展开剂的位置,作好标记。 1 、 展开剂假如过多,会有何后果？ ( B ) A、会使点样里的组份分不开 B 、估计会淹没所划出来的细线,从而溶解所 点的样 C、展开剂会挥发出来 D、展开剂与硅胶G发生反应 2 、假如斑点出现拖尾现象,这估计是什么原因? A、所点的试样的样点的圈太大 B、铺的薄板不均匀 C、薄板放的不平衡 D、薄板老化时间不够 A 感谢您的聆听！