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ssr标记在花生种质遗传育种中的应用 0 ssr标记在花生应用中的研究 花生是世界上的重要经济和油材料，也是重要的植物和蛋白质来源。遗传繁殖的研究一直受到高度重视。长期以来,花生育种工作者通过种质资源收集、整理和筛选,运用常规育种方法,开展了出口型、加工型、油用型、营养型及抗逆型等专用花生新品种选育工作,并取得了显著成绩。但是,常规育种方法普遍存在育种周期长、对目标单株的选择效率低、成本高等缺点,制约了花生育种的深入开展。近年来,随着分子遗传学研究的不断深入,利用分子生物学的方法对花生种质进行研究、定性分析及实现辅助育种方面已表现出很大的优越性。 简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)或称微卫星(microsatellite),又称短串联重复序列(short tandem repeats,STR)或可变数串联重复序列(variable number tandem repeat,VNTR),是广泛分布于基因组中由2～6个核苷酸组成的基本单位多次重复所构成的一段DNA序列,最先在人类基因组中发现,后来发现其普遍分布于各类真核生物基因组中,大约每隔10～550 kb就有一个微卫星标记。在单子叶植物中,毎隔64.6 kb含有一个微卫星序列(STR),在双子叶植物中则是毎隔21.2 kb含有一个序列STR。不同物种的微卫星的单位重复序列在数目整倍性及重复单位序列之间均存在变异,因而形成多个位点的多态性及其之间形态的差异基因。以双子叶植物为例,大豆中的高频率重复的序列中以(AT)n,(TAT)n重复序列表现的多态性最好,而花生的重复序列主要以(GA)n,(CT)n,(ATT)n为主。其中n代表重复次数,由于微卫星两侧序列在品种间、种间甚至属间都是高度保守的,重复次数不同扩增的特定位点SSR序列的DNA片段大小也不同,最终形成物种间、品种间甚至个体间的SSR差异带型。 花生分子标记的研究与应用在各类作物中长期处于较低的水平。鉴于此,过去的十年间,花生SSR标记的开发与研究并行,逐步缩短该类标记在花生与其他作物上如:玉米、水稻、大豆等应用水平间的差距。已有一系列实验证明利用发掘的SSR进行花生属种间材料的多态性分析鉴定是可行的。目前,随着新开发标记的增加,研究者们已实现了利用SSR进行花生属内的遗传多样性研究,对花生属资源及花生栽培品种进行定性分析,并发现了中国的育成品种遗传基础狭窄的现象。 对近年来花生SSR标记的相关研究进行分析和评述,介绍了国内SSR标记在花生遗传多样性、分子标记辅助选择育种方面的进展,展示了利用分子标记技术对提高种质资源利用效率及加快花生遗传改良起到的重要作用。 1 花生野生种及花生dna分子标记的应用 花生属隶属于豆科(Leguminosae),蝶形花亚科(Papiloonideae),是豆科较大的属。国际上正式命名的种有80个,其中,花生(A.hypogaea L.)为异源四倍体(2n=4x=40),是该属唯一具有重要经济意义的栽培种,其余均为二倍体或四倍体野生种。根据近代分类学研究的结果,Krapovicas和Gregory将花生属植物划分为9个区组(section),栽培种和其他31个野生种划入花生区组(section Arachis)。 花生属的野生种质资源丰富,染色体数目和基因上均具有较大的差异,因此在各种之间的表型存在较大差异。早期发掘的SSR标记,主要应用于检测花生属野生种之间的多态性。唐荣华等通过3种分子标记:SSR、AFLP、RAPD对花生属材料进行研究,其聚类结果能将所有种质区分开,与早先孙大容的花生植物学分类和Krapovickas的分类相似,同时将其检测到的结果进行比较发现SSR的多态性最为丰富,优于AFLP、RAPD引物。紧接着,唐荣华等尝试用SSR对花生属种间亲缘关系开展进一步研究,利用从栽培种基因组分离出的SSR分析花生属6个区组的19份野生种资源,共筛选出21对多态性SSR引物。经聚类证明,与花生区组野生种亲缘关系最近的是异形花区组,最远的是大根区组。同期,陈本银采用类似的研究思路对花生属材料进行研究:先开发引物,再利用引物分析材料。通过44对SSR特异引物对花生属不同区组的21份种质进行了分析,获得能稳定揭示花生属种间差异的引物34对引物,共检测到190个等位基因变异,每个位点上检测的等位变异数为3～11个,说明大多数花生SSR引物为多位点引物。聚类分析表明,匍匐区组的遗传分化大于其他区组的遗传分化,栽培种花生与花生区组材料的亲缘关系相对较近;A基因组的A.duranensis和A.villosa及B基因组的A.batizocoi与栽培种花生的亲缘关系更近,这与花生属的植物学分类一致。接着其又以花生属(Arachis)6个区组的84份种质为材料,用20