定量PCR中-ct值的含义.docxVIP

实时荧光定量 PCR 实时荧光定量PCR 技术于 1996 年由美国 Applied Biosystems 公司推出，由于该技术不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，并且与常规 PCR 相比，它含有特异性更强、有效解决 PCR 污染问题、自动化程度高等特点，现在已得到广泛应用。本文试就其定量原理、办法及参考问题作一介绍。 一. 实时荧光定量 PCR 原理 所谓实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反映体系中加入荧光基团，运用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过原则曲线对未知模板进行定量分析的办法。 Ct 值的定义 在荧光定量PCR 技术中，有一种很重要的概念 —— Ct 值。C 代表Cycle， t 代表 threshold，Ct 值的含义是：每个反映管内的荧光信号达成设定的域值 时所经历的循环数（如图 1 所示）。 图 1. Ct 值的拟定 荧光域值（threshold）的设定 PCR 反映的前 15 个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设立是 3-15 个循环的荧光信号的原则偏差的 10 倍，即：threshold = 10 ′ SDcycle 6-15 Ct 值与起始模板的关系 研究表明，每个模板的 Ct 值与该模板的起始拷贝数