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比色法检测芹菜提取物中总黄酮含量的研究 人们众所周知，吃得越多，越有利于健康，但由于营养不良，如老年人牙齿松弛、胃摄入量低、慢性疾病、食欲和水分减少等原因，无法摄入足够量的蔬菜。因此，有必要从植物中提取生物活性物质，并将其开发成特殊人群的保健食品。芹菜(Apium graveolens)属伞形花科的2年生蔬菜,含有丰富的黄酮类化合物,具有降压安神、降血脂、保护血管和增强免疫力等功能。本文分别以芦丁和槲皮素作为标准品对芹菜提取物中总黄酮含量进行定量分析,旨在为以芹菜提取物为原料的保健食品质量控制提供依据。 1 材料和方法 1.1 药品及化学品检定所 722分光光度计(山东高密分光仪器厂);芦丁(纯度99.99%)和槲皮素(纯度99.99%)均购自中国药品及生物制品检定所。其它试剂均为分析纯。 1.2 冷却、过滤 市售芹菜经去杂、清洗后,匀浆器制备匀浆,经5层纱布过滤去掉残渣;上清液在4℃条件下沉淀并去掉上清液,将沉淀冷冻真空干燥成为深绿色粉末备用。 1.3 测试方法 1.3.1 标准溶液的配制 精密称取槲皮素标准品21.8mg,置于100ml容量瓶中,加95%乙醇50ml使之溶解,然后加入50%乙醇稀释至刻度备用。精密称取芦丁标准品5mg,置于25m1容量瓶中,以95%乙醇溶解,并以50%乙醇稀释至刻度备用。 1.3.2 alcno3溶液 精密吸收芦丁、槲皮素标准液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml,分解置于10ml容量瓶中,各加入50%乙醇溶液使成5ml,精确加入5%NaNO20.3ml,摇匀后放置6min,加入10% AlC(NO3)30.3ml,摇匀再放置6min,加入20%NaOH溶液4ml,分别用50%乙醇稀释至刻度。摇匀,放置15min,于510nm波长测吸收度A值。 1.3.3 准确度测量 分别精密吸取芦丁、槲皮素标准液各2.0ml,重复5次,然后按照标准曲线制备项下操作,记录510nm波长下吸收度A值。 1.3.4 甲醇回流提取 精密称取芹菜提取物2.0291g,以滤纸筒包裹,置于索氏提取器中,用甲醇回流提取5h,回收甲醇,残渣以95%乙醇溶解,定容至100ml容量瓶中。精密吸取该样品溶液1.0ml、2.0ml和3.0m1,置于25ml容量瓶中,按照标准曲线制备项下操作,记取吸收度值并计算百分含量。 1.3.5 吸收度测定方法 精密吸取芦丁、槲皮素标准溶液各1.0ml、2.0ml分别于5只10ml容量瓶中,各加入精密吸取的样品溶液1.0ml,按标准曲线制备项下操作,在510nm波长处测吸收度值。 2 结果 2.1 基于鲁丁的标准曲线 以芦丁为标准品时制备标准曲线的结果见表1。 2.2 将瓜皮素作为标准样品时的参考曲线 以槲皮素为标准品时制备的标准曲线结果见表2。 2.3 精密度实验 两种标准进行精密度实验。芦丁平均吸收度为0.3354,精密度为0.3%,槲皮素平均吸收率为0.2716,精密度为0.2%。 2.4 样品中的总黄酮含量 以芦丁和槲皮素分别为标准品,测得芹菜提取物中总黄酮的含量见表3。 2.5 标准物质回收率的测定 分别以芦丁和槲皮素为标准品,测芹菜提取物中总黄酮的回收率结果见表4。 3 紫菜提取物 本文以两种方法分别测定了芹菜提取物中总黄酮的含量,其中以芦丁为标准品时芹菜提取物中总黄酮含量为1.05%,该方法的精密度为0.3%,平均加样回收率为102%;而以槲皮素为标准品时,芹菜提取物中总黄酮含量为1.11%,精密度为2%,平均加样回收率为99.56%。二种方法的检测结果很相近,说明检测结果准确可靠。 国内陈建初等报道不同品种的芹菜,不同部位(根、茎、叶)及不同的提取过程,其芹菜汁中的黄酮含量均有变化,但整株芹菜压榨法制备的芹菜汁中总黄酮含量为0.1～0.3%不等。本文使用的芹菜提取物其感官为深绿色粉末,具有浓厚的芹菜气味。因其主要提取过程是在低温条件下进行的,其功效成分较少受到破坏,因此芹菜提取物中总黄酮含量远大于芹菜汁中总黄酮含量,说明将其作为保健食品食物资源具有较大的市场前景。 芹菜中所含的黄酮主要为5,7,4′-三羟基黄酮(apigenin,芹菜苷)和毛地黄黄酮(Lateolin,木犀黄酮),芹菜的水溶性提取物中上述两种黄酮含量可分别达到128.3mg/kg和333.4mg/kg,但也有人报导芹菜水溶性提取物中apigenin含量可高达1783.2mg/kg,这可能与芹菜不同产地或不同品种有关。Tsi等报导了芹菜水溶性提取物对高血脂大鼠具有明显降低总胆固醇、甘油三酯及低密度蛋白胆固醇的作用,发挥这些生物作用的功效成分可能与黄酮有关,本文检测的是芹菜提取物中的总黄酮,其具体种类、化学成分及是否还包括其它类黄酮尚有待于进一步探讨。