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川楝素的拒食活性及在寄生虫上的应用 植物物质中的银草素具有医学、生理、药理学研究和应用的特殊性。对多种农业害虫也表现出高的生物活性。特别对蔬菜的重要害虫——菜青虫(Pieris rapae L.)的拒食、毒杀和田间防治等方面研究较为深入,对其毒理机制方面也作了初步探讨。但关于其中毒症状则报道较少。本研究以菜青虫为试虫,较系统地测试了川楝素中毒后所表现出的不同症状反应。 1 饲料或注射试验 川楝素纯品用川楝素粗品经多次重结晶而得,纯度在98.5%以上。从田间采回菜青虫幼虫,用甘蓝叶在室内饲养,挑取发育正常的5龄前期幼虫供试。试验中均用甘蓝作为饲料或寄主。取食、注射试验用文献[6～8]报道的试验方法进行。每浓度处理试虫70～90头。将川楝素配制成不同浓度(150～1000 mg/L)的乳液进行盆栽和田间小区喷雾防治菜青虫试验。 2 试验结果 2.1 品种的致病性 非选择拒食试验结果表明,川楝素对菜青虫有较强的拒食作用。在100～1000μg/mL浓度范围内,取食量随着浓度的增加而明显减少,但仍可以观察到取食现象。在800～1200μg/mL处理中,试虫仅在叶碟边缘咬食而造成微小缺刻。只有在1200μg/mL以上的浓度下才基本上完成拒食,最后因饥饿而死亡(约需4～6 d)。 菜青虫幼虫只有在取食了一定量川楝素后才表现出中毒症状。中毒症状又可因取食剂量、持续时间及进食速度的差异而表现出不同的形式。在300～800μg/mL浓度范围内,一部分过度饥饿的试虫可在2～4h内取食0.5～2 cm2的处理叶碟而快速昏迷。虫体呈挺直爬伏状。只有用镊子触动时才能发现是僵直状的中毒昏迷。在田间栽植菜苗上,这种类型的中毒虫体常用尾足倒挂在菜叶上而较易识别。经解剖观察,凡是僵直、昏迷的试虫,中肠中食物结成一块,剥去中肠组织后食物不解体。这类中毒幼虫约50%～60%可于15～24 h后复苏,如有新鲜饲料仍可继续取食,有的还可正常化蛹。 在500～1000μg/mL浓度范围内,由于川楝素的拒食作用,除少数过度饥饿的虫体外,大部分试虫在规定时间内取食量很少,且分多次进食,故其中毒症状表现缓慢。虫体在24～48 h后逐渐皱缩,常伴有拉稀粪便现象,甚至可将直肠部分拉出肛门外边(图1-1)。部分试虫可拉出一囊泡状物(图2-1)。多数试虫在48～72 h后,身体极度皱缩,虽触之可动,但不能爬行(图2-3),体表大量脱水而致全部虫体呈水渍状。田间防治试验中菜叶上也常可见到这类现象。这种类型的试虫一般在中毒2～3 d后逐渐死亡而不能恢复。 在250～600μg/mL浓度范围内,试虫取食次数和每次取食持续时间增加,取食量为对照组的10%～30%,在12～36 h内可摄取足量的川楝素而致中毒,但不表现出快速昏迷而呈浅度麻痹状。触之可微动,并常伴有阵发性抽搐,虫体向背后弯躬(图2-2),一次抽搐可延续几分钟之久。这类试虫不能复苏而在中毒后2～3 d内死亡。 室内及田间试验中较常见的中毒症状,是在取食了川楝素后的12～36 h,身体侧向弯曲,在另一侧的胸足至腹足之间出现一暗黑斑。虫体不麻痹、昏迷,虽可动但不能爬行。黑斑面积逐渐扩大,试虫于黑斑出现后12～24 h内死亡。经解剖观察,发现是因中肠穿孔破裂,食物漏出、腐烂而致。 在取食试验中,如试虫取食了少量处理叶片而没有致深度中毒,在添加新鲜饲料后,约有70%的试虫可继续取食。但在这些虫中约有一半以上不能正常化蛹羽化,多数死于预蛹阶段(图1-2～5)或化为畸形蛹(图1-6～8)。约占10%试虫虽可化蛹,但不能正常脱壳、羽化而成为畸形成虫(图1-10～12)。 2.2 试虫的免疫反应 在注射试验中也可观察到与饲喂试验中相似的各种中毒症状。由于是一次性给药,试虫中毒症状类型的出现只和受药的剂量有关。在注射2.5μg/头处理中,试虫可以呈现身体皱缩、脱水等症状。在0.5～1μg/头处理中,试虫可化为畸形预蛹或畸形蛹,也可羽化为畸形成虫;但在高剂量(5μg/头)注射处理中,试虫虽然在注射后10～30min内很快昏迷,但身体很柔软,显著不同于快速取食中毒的虫体。 2.3 绿色新鲜的使用 川楝素中毒的菜青虫幼虫尸体仍可在一段时间内保持绿色新鲜状态。除因中肠破裂、食物外漏而致局部腐烂变黑外,中毒死亡的虫体可保持2d以上不变色腐烂。 3 川吾素的致毒机理 对川楝素引致菜青虫幼虫各种中毒症状的观察和分析,有助于对其致毒机理的进一步研究。随着川楝素处理浓度、试虫持续取食时间的不同,所表现出的中毒症状亦显著不同。急性中毒后,虽然可以迅速麻痹、昏迷,但部分试虫还可以复苏而继续取食、发育;缓慢取食、逐渐积累中毒后,虽然症状表现轻,但不能恢复正常而死于幼虫阶段或变为畸形虫体;强硬直挺的中毒虫体主要是因为中肠内食物不能拉出结成硬块而致;注射试验对试虫中肠的破坏