酶与细胞的固定化课件.pptVIP

2．微囊型： 将酶或微生物包埋在高分子半透膜中的称为微囊型。其颗粒比网格型小得多，有利于底物和产物的扩散，但是反应条件要求高，制备成本(chéngběn)也比较高 例如：先用海藻酸钙包埋动物细胞制成胶粒后，再在外面包一层聚Lys膜，然后放入柠檬酸钠溶液中去除海藻酸钙，便可获得由多聚Lys包埋的动物细胞。 第五十三页，共一百一十四页。 (3) 脂质体（liposome)包埋法 脂质体：具有双层结构和一定包裹空间的微球体，它具有多层囊胞结构（MLV），单层小囊泡（SUV），单层大囊泡（LUV）等三种类型。 特点：一定的机械性能，能定向将酶等包裹物质携带到一定部位然后释放，具有更大的定向性；比较安全，回收率高。 缺点：在包埋过程发生(fāshēng)的化学反应同样会导致酶的失活。 第五十四页，共一百一十四页。 问题(wèntí)1 固定化酶有哪些(nǎxiē)方法?它们各有什么特点? 利用结晶法固定化酶需要载体? 不需要载体的固定化方法包括哪些? 非共价固定化酶的方法一般不改变酶的共价结构.共价法固定化酶一定改变酶的共价结构? 分散法固定化酶就是将酶分散于水溶液中进行催化反应? 第五十五页，共一百一十四页。 问题(wèntí)2 如何提高分散法固定化酶的催化效率? 吸附法固定酶,离子交换法固定化酶? 离子交换法所采用的载体应该带有与蛋白质相反的电荷?pI6.5的酶在pH8.3环境中应该与什么载体结合(DEAE或CM纤维素?) 可以进行共价固定化的载体基团主要(zhǔyào)包括? 可以进行共价固定化的蛋白质侧链基团主要包括? 第五十六页，共一百一十四页。 问题(wèntí)3 共价固定化就是将酶直接通过某种方式共价连接到载体的功能基团(jī tuán)上? 针对芳香氨基有哪些固定化方法?描述重氮偶联法的过程. 重氮偶联法基团活化时利用了盐酸,在很酸条件下进行,哪么为什么酶不会大部分失活? 可以与重氮衍生物结合的基团有哪些? 含有芳香氨基的载体包括哪些? 重氮偶联法具有比较高的专一性? 第五十七页，共一百一十四页。 问题(wèntí)4 异硫氰酸法是针对什么基团的载体(zàitǐ)进行的?基本过程? 能与蛋白质上的什么基团连接? 对多糖类的载体,一般采用什么方法进行固定化?溴化氰法的原理?基本过程如何进行? 溴化氰法的优缺点? 溴化氰法为什么要加入NaOH? 溴化氰法与酶结合时以什么方式为主? 第五十八页，共一百一十四页。 问题(wèntí)5 包埋法属于共价还是非共价固定化?有什么优劣(yōu liè)? 包埋法的原理及基本种类? 举例说明各种包埋法? 交联法常用的交联剂是什么? 交联法由于不需要活化基团,所以条件比较温和,酶活的回收率比较高? 第五十九页，共一百一十四页。 四．固定化酶的性质(xìngzhì) 酶的性质(xìngzhì)? 第六十页，共一百一十四页。 （一）固定化后酶活力的变化： 固定化酶的活力一般比天然酶小，专一性也有所变化。 原因可能有： 固定化过程中，酶分子空间构象会有所变化，甚至影响了活性中心的氨基酸； 固定化后，酶分子空间自由度受到限制（空间位阻），影响到活性中心与底物的定位作用； 内扩散阻力使底物分子与活性中心接近受阻(shòu zǔ)； 包埋时酶被高分子物质半透膜包围，大分子底物不能透过膜与酶接触。 第六十一页，共一百一十四页。 问题(wèntí) 固定化后酶的活力一定下降?一般会下降?原因(yuányīn)是什么? 第六十二页，共一百一十四页。 （二）固定化对酶稳定性的影响： 在大多数情况下酶经过(jīngguò)固定化后其稳定性都有所提高； 表现在：热稳定性提高；对各种有机试剂及酶抑制剂的稳定性提高；对不同pH稳定性、蛋白酶稳定性、贮存稳定性和操作稳定性都有影响。 有报道有些固定化酶经过贮藏后，其活性提高了 第六十三页，共一百一十四页。 问题(wèntí) 固定化后酶的活力上升(shàngshēng)了? 固定化后酶的稳定性上升了?也可能下降?为什么? 第六十四页，共一百一十四页。 （三）固定化酶的最适温度变化： 由于(yóuyú)固定化后酶的热稳定性提高，因此其最适温度也提高了，这对于生产上非常有利。 第六十五页，共一百一十四页。 问题(wèntí) 固定化后酶的最适温度(wēndù)上升的主要原因是什么? 第六十六页，共一百一十四页。 （四）固定化酶的最适pH变化： 固定化酶的最适pH值常常(chángcháng)发生偏离,主要是微环境表面 的电荷性质的影响. 如何(rúhé)变化? 载体(zàitǐ)带正电荷则最适 pH上上升偏低? 第六十七页，共一百一十四页。 （五）固定化酶的米氏常数(Km)的变化: 固定化酶