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丹参山楂提取物水浸膏对大鼠动脉粥样硬化的影响 动脉硬化（as）引起的心脑血管疾病严重威胁着人类健康。有许多理论包括脂肪质润合理论、损伤反应理论、免疫炎症理论和其他病因。中医论治讲究的是整体观念,使得中医药在AS的防治上发挥了重要的作用。目前,中医防治AS主要从活血化瘀、祛痰降脂、扶正补虚法入手。丹参为传统的活血化瘀药物,山楂调脂活血、药食两用。近年来,许多学者对此2味中药及其有效成分(丹参素、丹参酮、金丝桃苷、槲皮素和芦丁等)的降血脂和抗AS作用进行了大量的实验研究。但大多数的关注点仍停留在单味药或者单一的致病因素,本课题将丹参和山楂作为药对,从干预AS斑块形成以及抗氧化等角度,研究丹参山楂合用后对AS的影响,并初步探讨其可能的作用机制。 1 材料表面 1.1 鼠尾草属植物的干燥根鉴定 丹参、山楂药材均购于山东平邑县铜石镇山东鲁安中药饮片厂,经鉴定为唇形科鼠尾草属植物丹参Salvia miltiorrhiza的干燥根及蔷薇科山楂属植物山里红Crataegus pinnatifida var.major的干燥果实。 1.2 动物 Wistar大鼠,SPF级,雄性,体重(200±20)g,由军事医学科学院实验动物中心提供,合格证号SCXK(军)2007-004。 1.3 试剂和试剂盒 维生素D3(上海通用药业股份有限公司,批号090405);完全福氏佐剂(F5881),卵清白蛋白(A5253)均购于美国Sigma公司;切片石蜡(56~58℃,上海华永石蜡有限公司,批;中性树胶、苏木精、伊红Y(曙红)均购于国药集团化学试剂有限公司(批号分别20081204。血脂康胶囊(北大维信生物科技有限公司,批;总胆固醇试剂盒、甘油三酯试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇试剂盒,均购于北京北化康泰临床试剂有限公司(批号分别为0792-2008,0801-2008,0521-2008,0160-2008);超氧化物歧化酶试剂盒、丙二醛试剂盒、一氧化氮试剂盒,购于南京建成试剂有限公司(批号分别20091013。 1.4 切片机染色机 Shandon Excelsior ES全自动脱水机;Shandon Histocentre 3石蜡包埋机;Shandon Finesse325轮转式切片机;Shandon Varistain Gemini全自动染色机;Olympus BX51自动照相生物显微镜及图像分析系统;GF-D800型半自动生化分析仪(山东高密长虹有限责任公司)。 2 方法 2.1 山楂总水提取物 丹参提取物:称取丹参3.0 kg,以10倍量水回流提取1 h,纱布滤过,于水浴锅上蒸至浸膏状,得浸膏1.70 kg,每克浸膏相当于药材1.8 g,即得丹参总水提取物;山楂提取物:称取山楂3.0 kg,以10倍量水回流提取1 h,纱布滤过,于水浴锅上蒸至浸膏状,得浸膏1.44 kg,每克浸膏相当于药材2.1 g,即得山楂总水提取物;山楂丹参合煎剂:称取山楂1.5 kg、丹参1.5 kg,共计3.0 kg,以10倍量水回流提取1 h,纱布滤过,于水浴锅上蒸至浸膏状,得浸膏1.51 kg,每克浸膏相当于药材(山楂、丹参合计)2.0 g,相当于山楂1.0 g、丹参1.0 g,即得合煎总水提取物。 2.2 基础饲料水 1%胆固醇、0.2%牛胆盐、10%猪油、10%蛋黄粉、78.8%基础饲料,由北京科澳协力饲料有限公司提供,合格证号SCXK(京)2005-007。 2.3 大鼠的免疫损伤 大鼠适应性喂养1周后,随机分为空白对照组(13只)和造模组(70只)。空白对照组喂饲普通饲料,造模组喂饲高脂饲料。另外造模组大鼠一次性ip维生素D3 60万U·kg-1。并于第2天对造模组大鼠进行免疫损伤,具体操作:卵清白蛋白(OVA)以生理盐水溶解,取等量的OVA溶液和完全福氏佐剂,混匀后制成稳定的油包水型抗原乳剂,放置24 h以上应不分层。取1 m L抗原乳剂(含OVA 3 mg·kg-1)行大鼠背部皮下多点注射,3周后以1 m L OVA溶液(2.5 mg·kg-1)腹腔注射激发免疫反应,每周1次。并定期给予瓜子,改善其肠胃,增强抵抗力,观察饮水、体重、外观、活动等。造模时间为8周,于造模8周后随机抽取对照组1只,造模组5只观察主动脉的病理形态学变化,以观察到主动脉AS病变为标准确定造模成功。 2.4 各组合土、山楂、油松的组合 将造模组剩余大鼠按血清总胆固醇(TC)水平随机分为5组,每组12只:模型组、血脂康组、丹参组、山楂组、丹参山楂合煎组。给药量:丹参、山楂单用组分别为2.16 g·kg-1,合煎剂组为4.32 g·kg-1,阳性药