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单克隆抗体和重组治疗性蛋白质的聚体分析 生物制品中的聚体的来源，类型和大小不同，并且是由多个因素引发的。监管机构特别关注的是含有增强免疫应答从而引发不良临床反映的蛋白质聚体，或可能损害抗体或蛋白药品产品安全性和功效的聚体。在动物和临床研究中已经报道了蛋白质聚体能够增强免疫反映。尽管能够预期对人外源蛋白物质的免疫反映，但免疫系统可能会通过耐受性分解机制对含有内源性的聚集蛋白制品产生强烈反映。在耐受性破坏机制中，蛋白质聚体可在蛋白质复合物的形成中充当增进剂，这些蛋白质复合物可触发 B 细胞针对该蛋白质抗体的产生，而与 T 辅助细胞无关。这类反映的基础来自免疫原概念，其中抗原含有多于半抗原的聚合构造形式存在，在病毒样颗粒组织中间隔 5-10nm，大小超出 100kDa，能够克服免疫力。这种状况可能解释了内源性蛋白质的意外中和，并且产生了深远的临床效果。这种类型的机制最受关注的是高分子量（HMW）聚集体，这些聚体保存了其单体对应物的大多数天然构型，并且能够以这种方式使抗原成核。另外，显示非天然蛋白质构象的聚体可能被免疫系统视为新抗原，这可能会触发抗抗体形成。在这里我们提供了有关蛋白质药品中的聚体的表征，检测办法以及药品制造商已实施的多个控制方法的监管观点。 抗体或蛋白聚体的分类 聚体的分类是一项复杂的任务，现在还没有全方面的分类办法。分类的困难在于能够对聚合进行多个类别的分组。下表 1 列出了生物制药中最常见的聚体类别。为了有助于理解所讨论的聚体类型，常见的聚体类型有：二聚体，可逆聚体，共价聚体和颗粒，这些都是蛋白聚集中常见的形式。聚体的其它分类能够基于聚体的大小，由于这可能与潜在的不良临床反映直接有关。聚体的大小范畴从可溶性二聚体和其它多聚体（表观球状直径约 5-10nm），涉及高分子量（HMW）聚集体到可溶或不溶的有核聚集体，到较大的不溶性物质（被识别为亚可见和可见）颗粒（表观球状直径约 20–50μm）。在可溶性聚集体组中， 较大的聚集体（例如 HMW 物）可能更能引发产生不良临床后果的免疫原性应答。就其分子量而言，大小不不大于 10 的二次方 kDa 的聚体潜在的不良免疫原性反映潜力，值得更认真的评定。 聚体除大小外，聚体随时间的大小变化率是一种有用的参数，能够提供聚体的功效特性，其中时间对应蛋白质产品的使用期。聚体最初能够小二聚体或碎片的形式存在，并朝着更大的聚集构造变化，例如亚可见或可见颗粒（如果这种转变在热力学上温度变得快速）。在任何给定的时刻，蛋白质可能在有助于蛋白质单体或天然构型的热力学状态与有助于展开的天然蛋白质构型状态之间转变。在某些的条件下，未折叠的蛋白质可能与其它天然和非天然形式形成复合物，在获得足够的自由能以转变为可能成为新蛋白质实体而形成稳定状态的聚体。科学家 Lumry 和 Eyring 在 1960 年代研究了这些转变的基础，他们提出了溶液中蛋白质聚体的动力学转变，并在干扰素-γ聚集的状况下进一步转变为一级转变反映动力学。评定药品聚体总增加率的过程很复杂。单一药品产品普通含有不均匀的聚体混合物（如上表 1）。稳定的蛋白制品含有异质性溶液中存在的聚体，但与更不稳定的制品相比，其生长速率很小。聚体的增加速度加紧的更加令人担忧，可能需要更主动的控制和聚体控制最小化方略。 蛋白质聚集的来源 蛋白质药品的聚体能够有多个来源，并且多个类型的聚体能够存在于所分装的药品瓶中。蛋白质聚体形成的潜力存在于蛋白质药品制造的各个阶段。从蛋白质序列和特性开始，每种蛋白质将含有可使其或多或少的稳定物理化学特性。例如，游离巯基水平升高而发现在培养物中会产生聚集的 CHO 细胞体现的单克隆抗体（MAb）的聚集状况，如果将硫酸铜添加到培养物中，则能够避免这种状况的发生。随着多个蛋白质形式与其环境互相作用的可能性增加，蛋白质异质性也可能是蛋白质聚集的一种促成因素。对于依帕珠单抗，二 硫键会有助于共价聚体的形成。 治疗性单克隆抗体普通以高浓度配制，这也有助于增加分子互相作用的发生率，因此有可能形成聚体。因此，药品制造商耗费大量时间和精力来开发一种制剂，制剂将使蛋白质药品产品在其使用期内保持稳定，无论是在溶液中还是冻干产品。例如，将蔗糖添加至白介素-1 受体激动剂或冻干 MAb 制品以克制或减少聚体的形成。 生产、保存、运输中的大量冷冻对蛋白的质稳定制备提出了挑战，由于在溶液冷冻期间会发生溶质浓缩作用。抱负的方略是在–80℃下同时冻结整个溶液，并快速冻结，这样能够最大程度地减少热变迁（例如低共熔）和玻璃化转变。此方略对于大批量解决方案不切实际。大量冷冻期间溶质浓度和 pH 的变化也可增进蛋白质聚集。大量的解冻也带来这方面的挑战，这重要与冰-液界面的表面吸附有关。当需要大量冷冻和解冻时，适宜的制剂配方就变得至关重要，而赋形剂能够作为蛋白质冷