益气润肠通便颗粒醇提.docxVIP

仪器与试药 1.1仪器 Waters2695-2996高效液相色谱仪（在线脱气机，四元泵，自动进样器，柱温 箱，二极管阵列检测器;美国Waters公司）、Empower色谱数据工作站（美国Waters 公司）；LC-10ADVp型高效液相色谱；Millipore-Q超纯水制备仪（密理博公司，法 国）；FA1104型电子分万，上海精密科学仪器有限公司）；MS105DU型电子分析 天平（1/10万，梅特勒-托利多公司）；KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪 器有限公司）；数恒温水浴锅HH-4（国华电器有限公司）；TGL-16C高速离心机 （上海安亭科学仪器厂）；电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。 1.2试药 黄芪甲苷对照品（批号110781-200613）购自中国药品生物制品检定所、毛 蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（批号111920-201304）购自中国食品药品检定研究院。 黄芪、火麻仁、白术、枳壳、肉桂饮片均来自安徽丰原铜陵中药饮片有限公 司，批号均为141203批。五味药的饮片按照2010版《中国药典》一部规定从性 状、鉴别、检查、含量测有限公司化工分公司）；乙腈（色谱纯，山东禹王实业有 限公司化工分公司）；正丁醇、氨水为市售分析纯；水为超纯水。 实验与方法 2.1黄芪、火麻仁醇提工艺研究 根据工艺文献研究表明，黄芪、火麻仁等药材的有效成分为脂溶性物质1-2］， 以乙醇为溶媒，可以有效的提取出来［3-4］。 2.1.1黄芪、火麻仁醇提工艺正交试验 称取处方两倍量的饮片，黄芪24g,火麻仁20g,共9份，按表1-1、1-2相 应的因素水平回流提取，合并滤过液，水浴浓缩成浸膏，要求无醇味，取样测定 浸膏中浸出物得率、黄芪甲苷及毛蕊异黄酮苷的含量，进行方差分析，结果见表 1-3、 1-4。 测定的色谱条件为：照2010年版《中国药典》一部附录VIDE51测定。 黄芪甲苷：色谱柱为Diamonsil C18色谱柱（250mm X4. 6 mm，5 ^ m）； 流 动相为甲醇一水溶液（79： 21）；流速1.0ml/min； ELSD检测器，温度90°C，气体 流量 2.20SLPM［6］。 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含0.48mg的溶液，即得⑹。 供试品溶液的制备：约取相当于4.0g的黄芪生药的稠膏，精密称定，残渣 加水30ml，超声溶解，水溶液转移全分液漏斗中，加水饱和正丁醇振摇萃取4 次，每次40ml，合去氨试液，分取正丁醇提取液，水浴蒸干，残渣加蒸馏水5ml， 使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱长为12cm），用 水50ml洗脱，弃去水液，再％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继续使用70%乙 醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸十，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加 甲醇至刻度，摇匀，即得。进样量：10ul。运用外标两点法计算含量⑹。 毛蕊异黄酮葡萄糖苷:色谱柱为Diamo洗脱；流速1.0ml/min；时间0?20min， A相20?40%，B相80?60%；检测波长为260nm［6］。 对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲 醇制成每1ml含0.046mg的溶液，即得［6］。 供试品溶液的制备当于1.0g的黄芪生药的稠膏，精密称定，精密加入甲醇 50ml，称定重量，然后超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足缺失 的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，水浴蒸十，残渣加甲醇溶解，转 移至5ml容量瓶中，加刻度，摇匀，即得［6］。进样量：10ul。运用外标两点法计 算含量。 结果表明：以浸出物含量作为考察指标，由表1-2、1-3分析可知，各因素 对浸出物含量的影响均没有显著性差异，采用直观分析法可知，各因素影响程度 为ADBC，提取工艺以A1B3C3D3为佳；以黄芪甲苷含量作为考察指标，由 表1-2、1-4可知，各因素的影响程度为DBCA，由表1-4方差分析结果表明， D因素（提取次数）对黄芪甲苷含量的影响具有显著性差异，A、B、C因素无 显著性差异，提取工艺以a1b3c3d2为佳；以毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为考察指 标，由表1-2、1-5分析可知，各因素对毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的影响均没有 显著性差异，采用直观分析法可知，各因素影响程度为ACDB，提取工艺以 A1B3C3D2为佳，以中药提取液中有效成分的含量为主要考察因素，兼顾节约时 间提高效率，综合浸出物、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷方差分析结果，并结 合实际生产，确定最佳醇提工艺条件为A1B3C3D2，即乙醇浓度为60%，取12 倍量，分两次提取，每次两小时。 2.1.2黄芪、火麻仁等最佳醇提工艺条件的验证试验 称取处方四倍量的饮片，黄芪24g，火麻仁20