人IgE重链2--4区蛋白的真核表达、纯化及其靶分子捕获的任务书.docxVIP

人IgE重链2-4区蛋白的真核表达、纯化及其靶分

子捕获的任务书

一、任务背景

人免疫球蛋白E（IgE）是一种具有重要生物学功能的免疫球蛋白。它被广泛认为是哮喘、尊麻疹、鼻炎等变态反应性疾病的主要致病因素。人IgE由大小为50kD的重链和大小为25kD的轻链组成。重链由V（可变区）、C（恒定区）和4个连接区域（CHI、CH2、CH3和CH4）组成。其中，2-4个连接区域在IgE分子结构中占据了特殊位置。目前，人IgE的研究已成为国内外研究者的热点领域之一。近年来，随着研究人IgE在变态反应性疾病中的作用越来越深入,对人IgE重链2-4区蛋白的研究也日益重要。

二、任务内容

本次任务的主要目标是开展人IgE重链2-4区蛋白的真核表达、纯化及其靶分子捕获。具体内容包括：

.根据人IgE重链2-4区蛋白的序列信息，设计IgE重链2-4区蛋白的真核表达载体，构建真核表达质粒；

.将质粒转染至真核细胞，并通过WesternBlot、ELISA等方法检测

IgE重链2-4区蛋白的表达;

.利用免疫亲和层析、离子交换层析、柱外等工艺方法，对IgE重链2-4区蛋白进行高效纯化；

.利用IgE重链2-4区蛋白纯化后的产物，进行靶分子捕获实验;

.对捕获到的靶分子进行质谱等方法的分析。

三、任务要求

.根据任务目标和内容，设计合理的实验方案，保证实验的科学性

.熟练掌握IgE重链2-4区蛋白的真核表达、纯化及其靶分子捕获的

常规实验操作技术和操作流程；

.准确记录实验结果，并撰写实验报告；

.严格遵守实验室环境、安全及合理化管理规定。

四、预期成果

.成功构建IgE重链2-4区蛋白的真核表达载体，并通过WesternBlot、ELISA等方法检测其表达效果；

.成功利用免疫亲和层析、离子交换层析、柱外等工艺方法，对IgE重链2-4区蛋白进行高效纯化；

.成功进行靶分子捕获实验，并鉴定捕获到的靶分子；

.准确记录实验过程和结果，并撰写实验报告。

五、参考文献

E.Seibold,etal.,JournalofAllergyandClinicalImmunology135,1562-1565(2015).

X.Chen,etal.,PLoSOne12,e0188474(2017).

A.R?Lauer,etal.,JournalofMedicinalChemistry62,9933-9942(2019).