演示文稿第三代基因测序原理及应用.pptVIP

在单个碱基掺入增长的DNA链时检测它们。当每个dNTP加入时对荧光标记的终止子成像，随后切割，允许下一个碱基的掺入。由于每个测序循环中四种可逆终止子结合的dNTP都存在，所以自然竞争让掺入偏差最小化。根据每个循环的信号强度测定直接检出碱基，与其他技术相比大大降低了原始错误率。最终结果是高度准确的base-by-base测序，避免了序列内容特异的误差，实现了可靠的碱基检出，即使是那些重复序列区和均聚物。*（4）测序测序方法采用边合成边测序的方法。向反应体系中同时添加DNA聚合酶、接头引物和带有碱基特异荧光标记的4中dNTP（如同Sanger测序法）。这些dNTP的3’-OH被化学方法所保护，因而每次只能添加一个dNTP。在dNTP被添加到合成链上后，所有未使用的游离dNTP和DNA聚合酶会被洗脱掉。接着，再加入激发荧光所需的缓冲液，用激光激发荧光信号，并有光学设备完成荧光信号的记录，最后利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基。这样荧光信号记录完成后，再加入化学试剂淬灭荧光信号并去除dNTP3’-OH保护基团，以便能进行下一轮的测序反应。*（4）测序测序方法采用边合成边测序的方法。向反应体系中同时添加DNA聚合酶、接头引物和带有碱基特异荧光标记的4中dNTP（如同Sanger测序法）。这些dNTP的3’-OH被化学方法所保护，因而每次只能添加一个dNTP。在dNTP被添加到合成链上后，所有未使用的游离dNTP和DNA聚合酶会被洗脱掉。接着，再加入激发荧光所需的缓冲液，用激光激发荧光信号，并有光学设备完成荧光信号的记录，最后利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基。这样荧光信号记录完成后，再加入化学试剂淬灭荧光信号并去除dNTP3’-OH保护基团，以便能进行下一轮的测序反应。**（优选）第三代基因测序原理及应用本文档共21页；当前第1页；编辑于星期日\18点34分什么是DNA？DNA是英文Deoxyribonucleicacid的缩写，中文含义为脱氧核糖核酸。脱氧核糖核苷酸的类型：

腺嘌呤（A）=胸腺嘧啶（T）胞嘧啶（C）=鸟嘌呤（G）DNA分子的排列顺序是可以检测的，从而可以解读遗传信息，即测序。DNA结构（视频）本文档共21页；当前第2页；编辑于星期日\18点34分什么是基因？

基因是具有遗传效应的DNA分子片段，由许多脱氧核苷酸按照一定的碱基顺序构成的长链聚合物。基因身高肤色智商胖瘦本文档共21页；当前第3页；编辑于星期日\18点34分基因组：一个细胞内的全套染色体为一个基因组，或是一个细胞中的全部DNA为一个基因组什么是基因组？

基因组染色体基因本文档共21页；当前第4页；编辑于星期日\18点34分测序技术发展史本文档共21页；当前第5页；编辑于星期日\18点34分第一代测序原理-Sanger测序法双脱氧链终止法（Sanger法）：1977年，英国人FredSanger发现，如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会产生一系列末端终止的DNA链，并能通过电泳按长度分辨。不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。本文档共21页；当前第6页；编辑于星期日\18点34分复制叉（Replicationfork）DNAligase：DNA连接酶；DNAgyrase：DNA旋转酶；DnaBhelicase：解旋酶SSB：单链结合蛋白；本文档共21页；当前第7页；编辑于星期日\18点34分DNA连接酶（DNAligase）功能：连接DNA链3‘-OH末端和另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。DNA复制本文档共21页；当前第8页；编辑于星期日\18点34分Sanger测序法本文档共21页；当前第9页；编辑于星期日\18点34分第一代测序成果：人类基因组2001年2月份同时发表，从此有了人类基因组模板。本文档共21页；当前第10页；编辑于星期日\18点34分ATCGAACTTCCATTGCACCAATATAGGTACGTAAATCGAACTTCCTTGCACCTATATAGGTGTACGTAA参考序列：测序所得序列：碱基缺失碱基突变碱基重复特点：测序长度700-1000bp；通量小，一次96个样本，每个样本1条序列临床应用：单基因病检测，如血友病、白化病、地中海贫血等本文档共21页；当前第11页；编辑于星期日\18点34分第二代测序原理-高通量测序