三七总皂苷脂质体的制备及其生理适应性考察.docxVIP

三七总皂苷脂质体的制备及其生理适应性考察

三七是中国传统的稀有中药。根据药理学研究，它具有扩张冠状动脉、改善心肌缺血、减少心肌消耗、扩张血管、抗心力衰竭等作用。临床应用其总皂苷(SaponinsofPanaxNotoginseng,PNS)治疗中风、脑血栓、冠心病、心绞痛、动脉粥样硬化、视网膜中央静脉阻塞等。目前已有三七注射液及口服片剂、胶囊等产品面市,但注射液通过静脉滴注给药,患者顺应性和安全性较差,而口服片剂和胶囊由于PNS受胃肠道酶、细菌及pH值等多种因素影响,生物利用度较低。因此开发三七总皂苷新的剂型和给药途径显得非常必要。肺部给药是一种很有发展潜力的新型全身给药途径:吸收面积大,毛细血管丰富,肺泡壁薄,生物代谢酶的活性低,能避开胃肠道对药物的不利影响,有利于提高药物的生物利用度。肺泡表面液层主要为表面活性剂,其中脂质成分约占90%。因此,将药物包裹入脂质体经肺部给药,脂质体与肺泡壁有较好的生物相容性,不易引发毒性和免疫性反应,药物通过磷脂双分子层缓慢释放,能够提高药物的生物利用度并降低药物的毒副作用。因此,本课题设计并研制了三七总皂苷脂质体,并对其生理适应性进行了初步的考察。

1药品与试剂

仪器:ZX-98旋转蒸发仪(上海有机化学研究所);Zeta电位及粒度测定仪(NicompTM380ZLS,SantaBarbara,California,USA);TJ-25低温高速离心机(BeckmanCoulterTM,USA);TGL-16C台式离心机(上海安亭科学仪器厂);电子分析天平(METTLERAE200);岛津LC-10A型高效液相色谱仪,SPD-10A型紫外可见检测仪;HypersilODS5μm,150mm×4.6mm色谱柱(大连伊利特)

药品与试剂:三七总皂苷(DFC-SQZD-01,云南文山,本校生药教研室陈道峰教授赠);注射用大豆磷脂(上海太伟药业有限公司);胆固醇(中国医药集团上海化学试剂公司);乙腈,色谱纯(TEDIA,TEDIACompany,USA);甲醇,色谱纯(江苏汉邦科技有限公司);其他试剂均为分析纯。

动物:SD大鼠,体重(250±30)g,♀♂各半,复旦大学上海医学院实验动物中心提供。

2方法

2.1phns脂质体的制备

薄膜分散法制备PNS脂质体。准确称取处方量的注射用大豆磷脂、胆固醇,加适量乙醚使其溶解并转移至250mL茄形瓶中。置25℃恒温水浴减压蒸发除去乙醚,使脂质在瓶壁上成均匀薄膜。茄形瓶置真空干燥箱内真空干燥过夜后,瓶内加入含处方量PNS的pH6.8磷酸盐缓冲液(PBS)适量以及2粒直径为0.8mm的搅拌珠,25℃恒温水浴旋转洗膜1h,得乳白色混悬液,即PNS脂质体。

超速离心法分离脂质体与游离药物,RP-HPLC测定游离药物浓度,包封率的计算公式如下:

EntrappingEfficiency(%)=C总-C游离C总×100%(%)=C总?C游离C总×100%

2.2pns脂质体包封率的影响因素

经预实验并参考文献,以包封率为考察指标,对PNS脂质体包封率可能有影响的因素进行单因素考察。

2.2.1单因素考察大豆卵磷脂与胆固醇的重量比对PNS脂质体包封率的影响,待考察的大豆卵磷脂与胆固醇的重量比分别为1∶1,4∶1和9∶1。

2.2.2单因素考察水相介质种类对PNS脂质体包封率的影响,待考察的水相介质分别为去离子水,pH5.3PBS,pH2.0PBS和pH7.8PBS。

2.2.3单因素考察脂质与三七总皂苷的重量比对PNS脂质体包封率的影响,待考查的脂质与三七总皂苷的重量比分别为0.5∶1,1.25∶1,5∶1和10∶1。

2.2.4单因素考察三七总皂苷在磷酸盐缓冲液中的浓度对PNS脂质体包封率的影响,待考查的三七总皂苷在磷酸盐缓冲液中的浓度分别为25mg·mL-1,75mg·mL-1,150mg·mL-1和200mg·mL-1。

2.2.5单因素考察结果发现,大豆卵磷脂与胆固醇的重量比,水相介质的种类对PNS脂质体的包封率影响很小,只有脂质与三七总皂苷的重量比和三七总皂苷在磷酸盐缓冲液中的浓度对包封率影响较大,故进行析因设计,以确定PNS脂质体的最优处方。

2.3ph值及粒径大小分析

粒径测定PNS脂质体适量经pH6.8PBS稀释后,应用Zeta电位及粒度测定仪测定其粒径大小。

形态观察PNS脂质体适量置铜网上,经磷钨酸负染后,于透射电镜下观察脂质体结构。并取适量经稀释后,置于光学显微镜下观察其形态和分布。

2.4生理适应性研究

2.