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2023-12-30 发布于江西
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虾肌肉蛋白的提取.pptx

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虾肌肉蛋白的提取虾肌肉蛋白的提取第1页

小飞守角制作主要内容凡纳滨对虾肌肉蛋白提取方案1讨论2虾肌肉蛋白的提取第2页

凡纳滨对虾肌肉蛋白提取方案对虾前处理取对虾肌肉组织500mg剪碎、液氮研磨至粉末状添加裂解液离心凡纳滨对虾弃头剥壳、去肠、去血，用蒸馏水洗净沥干水分，于-18℃贮藏备用500μL，4℃孵育1-2h分装于离心管中（50mg/管）13000r/min低温（4℃）离心2h抽提，即为蛋白样品，于-18℃保留备用定量检测蛋白质浓度考马斯亮蓝法分组虾肌肉蛋白的提取第3页

讨论从对虾内部选取肌肉组织。对虾全身覆盖着一层几丁质壳，去壳时不能确保完全去除这层薄膜，而且肌肉中必定存在着肉眼无法区分结缔组织。肌肉组织选取-18℃保留。对虾在-20℃、-30℃、-40℃蛋白变性差异不显著（陶欢，）。对虾保留虾肌肉蛋白的提取第4页

讨论液氮研磨低温蛋白结构虾肌肉蛋白的提取第5页

讨论浓度8mol/L尿素、浓度2mol/L硫脲、浓度2%CHAPS、浓度10μl/mLPMSF、浓度18mmol/LDTT、浓度0.5%IPG缓冲液。8M尿素9.6g，4%CHAPS0.8g，40mMTris0.0484g，用前每1mL裂解液中添加5μLCarrierAmpholyte（载体两性电解质）,200mMTBP（三正丁基磷）10μL。裂解液Ⅰ裂解液Ⅱ虾肌肉蛋白的提取第6页

讨论灵敏度时间特点双缩脲法1~20mg8~10h干扰相对少，灵敏度低紫外吸收法50~100μg5~10min快速，灵敏度低，干扰多Lowry法20~250μg40~60min干扰多、费时、操作严格、灵敏度高Bradford法1~5μg5~15min灵敏、快速、简便、干扰少、稳定虾肌肉蛋白的提取第7页