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Hemin 诱导K562 细胞向红系细胞分化的蛋白质组学研究

2.l.1主晏试剂

DMEM高塘培养基购自Gibco公司：FBS购自Hyclone·公司．Hemin、DMSO、MTf、甲轻，、硫代硫酸钠 均购［自Si炉让Aldrich公司；联 苯胺购自中国远航试剂厂，细胞周期 检浏试剂盒购自南京凯基 低熔点琼脂糖购自上浔生工生物工程技术服务有限公司；超纯尿 素(U心）、硫朦(Thiourca)、甘氨酸(Oly）、三胫甲基氨基甲炾(Tris)、丙烯酰胺(Ac订mid.c)｀甲叉双丙烯酰胺(!Bis)、3-((3－胆酰胺丙基）－二乙胺J-1]丙磺酸(CHAPS:)、87％甘油均购自PlusOnc,二硫苏糖醇{DTI)、IPG绥冲液(pH3-IONL)，、填乙酰胺 (IAA)、过硫酸胺(AP)、四甲基乙二胺(TEMED)、淏酚蓝、矿物油·、十二烧基磺酸钠等购目GEH叫thcam公司。

2.I.3试剂配剞

PBS,8g氯化钠，0.2g氯化钾，2.9g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，用去离子水定

容互lL.

生理盐水(O,85%NaCl)．8,5gNaC1，用去离子水定容芘IL.

He:min(4mM储存液）：称取0.039ghcmin粉末千SOmL离心管中，先加2.5011L1mo讥的NaOH溶液将其充分溶解，再加IOmL的去离子水，用a·mo讥的HCI调节pH至7.1，定容至ISmL，用叱，22μm滤膜过滤除酉后20t 遐光保存．

联苯肢染液称取OOO2g联苯肢粉末千iOmL离心笞中，先加入5μL冰乙酸用玻硝棒充分研磨，反复数次，补加冰乙酸至150吐溶解5min,再加入4.85mL生理盐水，即终浓度为0..4oo/(w/v),0.22严滤膜过滤后4C避光保存．

M九 5mgImL，称取250mgMIT．用SOmlPBS(pH7?）溶解，0.22叩滤赎过滤后20-C

进光保存．

裂解液：1% DTT ., 8:/l4CHAPS,2%[PG缓冲液，2M硫莺，7M尿索．

上祥绶冲汲 50mMTris-HCI(pHU). 100mMo-rr.2?SDS,20％甘油，0.1％漠酚

蓝令

水化液；8M 尿素，2％CHAPS,o.5%lPG缓冲液，0.1%淏酚蓝；使用前 现加3%Drr.

平衡缓冲液：6M尿素，2%SOS,50mMTr,isHCl(pHS8.),30％甘油，0.1%淏酚芷

两次平衡液使用前分别现加1%DTT和2.5％镇乙酰胺．Tris-HCI缓冲液,1.5Mfos(pH8.8)

AcFBi＄溶液；29.Z%Ar,0.8%Bis

,n

10%SDS,10gSDS,去离子水定容至100mll0%AP: lg战，l0mL去离子水（现用现配）

SDS电极缓冲液 25mMTris;192.mM甘氨酸，0.1%SDS

1%固胶液，Lg低熔点琼脂同 100m!LSDS电极经冲液，0.1％澳酚蓝固定液：4OO/4乙醇．IOO/4乙酸．soo/4去离子水

敏化液；30％乙醇，O，32％五水合硫代硫酸钠，ll,25％三水合乙酸钠银染液：0.25％硝酸银

显色液：2.5％碳 酸钠．0.04％甲哑终止液 ：1.46% EDTA--2!Na

2,l-4主置仪暑

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