疏水层析法纯化蛋白质.疏水层析法纯化蛋白质.pptVIP

岗位演练疏水层析法纯化蛋白质1任务五人干扰素α2b的疏水层析

查阅资料，结合生活常识了解鸡蛋清组成及性质。查阅设计《疏水层析法纯化蛋白质操作记录》，在任务实施过程中同步填写。取鸡蛋蛋清，盐析法分别制得蛋白质溶液，再用疏水层析法分离蛋白组分，并检测分离的效果。设计实操设计（一）任务描述2

（二）实训材料1.材料、试剂新鲜鸡蛋、上样缓冲液（20mmol/L，pH7.0磷酸钠盐，50％硫酸铵溶液）、硫酸铵。2.仪器设备5mLHiTrapPhenylHP预装层析柱（预填充有5mLPhenylSepharose6FF填料）、5mL注射器、50mL注射器或层析系统、高速冷冻离心机、0.22μm滤膜与滤器、紫外分光光度计。3

（三）实训操作生产前准备样品的制备疏水层析柱平衡蛋白质溶液上样层析柱的洗涤蛋白质组分的洗脱层析柱的清洗与再生层析柱的保测和分析910清场4

（三）实训操作5步骤一试剂配制配制20mmol/L，pH7.0磷酸钠盐缓冲溶液。步骤二样品的制备取新鲜蛋清5mL于试管中，加入5mL去离子水混合均匀。计算该蛋清溶液硫酸铵质量浓度达75%所需要硫酸铵的量，准确称取硫酸铵，研磨后少量多次加入到蛋清溶液中。静置5min后8000r/min离心10min，弃上清液，取沉淀。将沉淀溶解于硫酸铵质量浓度为50