CHO-K1细胞传代.cho-k1细胞传代.pptVIP

;;;;（1）用镊子将要复苏的细胞冻存管从液氮罐中取出。

（2）将细胞冻存管立即放入37℃的水浴中，轻摇至迅速融化（1min内）。

注意：

操作者进行以上操作时，要佩戴护目镜，防止因冻存管意外炸裂带来伤害。

（3）将融化好的细胞冻存管放入离心机中，补加DMEM/F12培养基至10mL，1000r/min，离心10min，倒弃上清液。

;（4）用5mL吸管吸取适量DMEM/F12吹悬细胞沉淀，使细胞吹散悬浮，转入25cm2的细胞培养瓶中。

（5）在培养瓶上写明细胞的唯一性信息、复苏日期及操作者等信息。

（6）接种后的细胞培养瓶置5%CO2、37℃二氧化碳培养箱培养。次日可以换液，弃去漂浮的死亡细胞，此时存活的细胞大部分可生长并增殖，一般一支细胞冻存管复苏后接种一瓶。24h后观察细胞。

（7）CHO细胞的复苏工作完成后，操作人员应及时填写相应的记录表格。;7;（1）从CO2培养箱中拿出细胞培养瓶，对细胞培养瓶表面进行酒精消毒后，放入局部A级操作台内。使培养瓶的细胞面向上，用吸管吸出培养液（操作熟练后也可将培养液倒入盛污物的三角瓶内，避免倒出的液体回流，或两瓶口相接触，以免发生污染），弃掉。

（2）用PBS液清洗2～3次，每次约用2mL。

（3）向培养瓶内加入胰蛋白酶消化液约2mL，室温下消化（也可以选择胰蛋白酶最适温度37℃）。此步为传代的关键步