内质网应激-Wnt_β-catenin循环对内皮功能障碍影响的研究.pdf

摘要

摘要

目的：

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）与心血管疾病密切相关，而内皮功能障

碍（Endothelialdysfunction,ED）是AS发生的起始，此外，内质网应激（ER-

Stress）和Wnt/β-catenin信号通路都可促进ED。本实验室已有研究表明，通过

HO或直接添加胆固醇（Cholesterol）处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）均可

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引起细胞胆固醇堆积，激活ER-Stress和Wnt/β-catenin信号通路，最终导致ED。

但ER-Stress和Wnt/β-catenin信号通路间的具体关系还有待研究。为了深入探究

它们间的关系，本论文利用衣霉素激活ER-Stress，沙利霉素或shRNA技术敲低

LRP6以抑制Wnt/β-catenin信号通路，并检测相关分子的表达和含量及细胞的生

物学行为。

方法：

1、利用衣霉素激活ER-Stress，沙利霉素抑制Wnt/β-catenin信号通路，研究对

ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路、胆固醇流出和内皮功能障碍的影响

为研究ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路与胆固醇流出之间的关系。本文

将HUVECs分为以下四组：C组（对照组）、Tun组（衣霉素组）、Sal组（沙

利霉素组）和Tun+Sal组。Westernblot检测ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路、

胆固醇流出和ED相关蛋白分子的表达，免疫荧光技术检测胆固醇和ROS的含

量，利用试剂盒检测LDH、SOD和NOS的含量，THP-1细胞与HUVECs共培

养进行细胞黏附实验。

2、敲低LRP6对ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路、胆固醇流出和内皮功能

障碍的影响

为了进一步确定ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路与胆固醇流出之间的关

系。本文将HUVECs分为以下四组：C组、Tun组、shLRP6组和Tun+shLRP6

组四组。检测ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路、胆固醇流出和ED相关蛋白分

子的表达，免疫荧光技术检测胆固醇和ROS的含量，利用试剂盒检测LDH、

SOD和NOS的含量，THP-1细胞与HUVECs共培养进行细胞黏附实验。

II

摘要

结果：

1、ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路通过相互影响调控ED的发生

（1）ER-Stress、Wnt/β-catenin信号通路之间相互影响：衣霉素不仅激活ER-

Stress，还可激活Wnt/β-catenin信号通路。沙利霉素不仅抑制Wnt/β-catenin信号

通路，还可抑制ER-Stress。

（2）ER-Stress和Wnt/β-catenin信号通路均可调控胆固醇流出：衣霉素可激活

ER-Stress和Wnt/β-catenin信号通路，抑制胆固醇流出相关分子ABCA1和

ABCG1的表达及促进胆固醇堆积，而沙利霉素可以逆转上述过程，促进胆固醇

流出。

（3）ER-Stress和Wnt/β-catenin信号通路通过相互影响调控ED：衣霉素可引

起HUVECs中LDH和ROS含量升高，但SOD和NOS含量下降，黏附能力增

强，而沙利霉素可以逆转上述过程。

2、敲低LRP6可缓解ER-Stress对胆固醇流出抑制及促ED的影响

（1）敲低LRP6可抑制ER-Stress：敲低LRP6可以抑制Wnt/β-catenin信号通

路和ER-Stress。

（2）敲低LRP6可促进胆固醇流出：敲低LRP6可促进胆固醇流出相关分子

ABCA1和ABCG1的表达及降低胞内胆固醇堆积，并缓解ER-Stress对ABCA1

和ABCG1表达的抑制及胆固醇堆积的作用。

（3）敲