内毒素刺激下PD-1通过PI3K_AKT_mTOR途径抑制肠道相关淋巴细胞归巢及免疫功能.pdf

摘要

摘要

背景：脓毒症是主要的医疗问题之一，也是目前ICU内患者死亡的主要原

因之一，由于对脓毒症的认识仍不全面亦缺少安全且高效的治疗手段，研究脓

毒症的病理生理机制，探索高效安全的特异性治疗途径极为必要。肠道屏障是

机体防御感染的重要防线，肠道相关淋巴细胞归巢是肠道调节淋巴细胞运转的

一种特殊机制，可通过归巢受体整合素α4β7使淋巴细胞对肠道进行定向迁移至

肠道免疫系统，归巢是免疫系统发挥免疫效应的重要环节。有许多研究表明脓

毒症会导致淋巴细胞发生免疫功能失调节并伴随免疫细胞上抑制性受体PD-1的

表达上调，但暂无研究表明PD-1是否影响归巢受体整合素α4β7影响淋巴细胞的

归巢过程并导致免疫抑制，由于已有的数据已经证实PD-1是导致脓毒症免疫抑

制的重要原因之一，我们推测脓毒症中的PD-1可能通过下调整合素α4β7的表达

导致淋巴细胞无法顺利完成归巢过程从而导致脓毒症后期的免疫抑制，为了明

确脓毒症免疫抑制是否通过PD-1导致肠道相关淋巴细胞归巢机制受损以及调控

发生作用的具体途径，我们设计了本次实验。

目的：研究脓毒症时淋巴细胞肠道整合素α4β7的表达是否受影响，以及该

受体与PD-1并PI3K/AKT/mTOR通路的关联性。

方法：采用YAC-1小鼠淋巴瘤细胞株，通过CCK8确定LPS确定给药浓度，

LPSYAC-1NC

使用刺激细胞模拟脓毒症模型，根据处理方式的不同分为组，

LPS12h组、LPS24h组、LPS48h组、sh组、sh+LPS12h组、sh+LPS24h组及

sh+LPS48hELISAIL-2IFN-γTNF-α

组。通过测定培养基中、、等炎症因子的表

PCPD-1mRNAWesternBlot

达水平，通过荧光定量测定的表达水平，通过测

定PD-1、PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达量，通过流式细胞术测定YAC-1淋巴

瘤细胞系的整合素α4β7极其细胞表型CD4+的表达变化。

结果：在模拟脓毒症的细胞模型中，我们发现随着LPS刺激时间变长，PD-1

逐渐增高，PI3K/AKT/mTOR途径下调，归巢受体整合素α4β7表达在长时间的

刺激下出现降低的情况，炎症因子的表达水平的变化也与归巢受体整合素α4β7

趋同，PI3K/AKT/mTOR途径随着PD-1升高受到抑制加强，PD1敲低之后，

PI3K/AKT/mTOR途径比敲低前上调，且α4β7和炎症因子表达水平整体高于敲

低之前。

II

摘要

结论：通过实验结果，我们初步得出结论，PD-1通过PI3K/AKT/mTOR途

径抑制整合素α4β7表达并导致淋巴细胞的免疫功能障碍，这一途径参与了脓毒

症免疫抑制的过程，抑制PD-1的表达可去除部分抑制效应，维持脓毒症中α4β7

的表达稳定及保护淋巴细胞的免疫功能。

PD-1mTOR

关键词：脓毒症；；；整合素；归巢

III

Abstract

ABSTRACT

Background:

Sepsisisoneofthemajormedicalproblemsandoneofthemaincausesofdeath

inICUpatients.Duetothelacko