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酵母双杂交技术筛选hBex1相互作用蛋白的开题报告

酵母双杂交技术是一种广泛应用于蛋白质相互作用研究的实验方法。该技术利用酵母细胞内存在的转录激活因子与其靶标序列结合的原理，将两个可能存在相互作用的蛋白分别连接到两个不同的酵母转录激活因子上，然后将它们一起转入酵母细胞内，通过检测细胞内表达的报告基因来判断这两个蛋白是否存在相互作用。

本实验旨在利用酵母双杂交技术筛选出hBex1（人类Brain-expressedX-linked）相互作用蛋白。hBex1基因位于人类X染色体上，其编码的蛋白质与神经系统发育和信号传递等生物学过程有关，因此鉴定其相互作用蛋白对于进一步探究其功能及相关疾病具有重要意义。

实验具体步骤如下：

1.将hBex1基因克隆至酵母表达载体pGBKT7中，得到hBex1-pGBKT7构建物。

2.从人类脑组织中提取RNA，制备cDNA文库。

3.将cDNA文库克隆至酵母表达载体pGADT7中，得到pGADT7-cDNA文库。

4.将hBex1-pGBKT7构建物和pGADT7-cDNA文库共转入酵母菌株AH109中，得到转化子。

5.利用酵母可生长在Trp和Leu缺失的SD/-Leu/-Trp平板上的特性对转化子进行筛选，筛选出能同时生长在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade平板上的阳性克隆，这些克隆表示两个融合蛋白存在相互作用。

6.对阳性克隆进行BLAST比对和功能注释，鉴定hBex1相互作用蛋白。

通过以上实验步骤，我们可以筛选出hBex1相互作用蛋白，进一步探究其功能及相关疾病的发病机制。