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第五七节基因工程的技术和方法二

汇报人：AA

2024-01-28

基因工程概述

基因工程基本技术

基因工程表达系统

基因工程载体与宿主

基因工程在医学领域应用

基因工程在农业领域应用

基因工程在环保领域应用

目录

01

基因工程概述

基因工程定义

基因工程是通过人工手段，在实验室里对生物的遗传物质--DNA分子进行操作的技术，包括基因重组、基因克隆和基因编辑等。

发展历程

自20世纪70年代基因工程诞生以来，随着分子生物学和生物技术的飞速发展，基因工程领域取得了显著的进步和成果，广泛应用于农业、医药、环保等领域。

农业领域

01

通过基因工程技术改良作物品种，提高产量和品质，增强抗病虫害能力，减少农药使用量，为农业生产带来了巨大的经济效益和生态效益。

医药领域

02

基因工程在医药领域的应用主要包括基因诊断和基因治疗。基因诊断可以帮助医生更准确地诊断疾病，基因治疗则可以通过修复或替换缺陷基因来治疗遗传性疾病和某些癌症等。

环保领域

03

基因工程技术在环保领域的应用主要包括污染物的生物降解和生物修复。通过基因工程技术改良微生物，使其能够降解环境中的有害物质，达到净化环境的目的。

基因工程领域涉及的伦理问题主要包括人类尊严、生命价值、社会公正等。例如，基因编辑技术可能会改变人类的基因组成，从而引发关于人类本质和尊严的争议。

伦理问题

为了规范基因工程领域的发展，各国政府纷纷制定了相关的法律法规。这些法规主要涉及基因工程技术的安全性、伦理道德、知识产权保护等方面，旨在保障公众的健康和安全，促进基因工程技术的可持续发展。

法规监管

02

基因工程基本技术

DNA连接酶连接

将具有相同或兼容末端的DNA片段连接起来，形成重组DNA分子。

转化和筛选

将重组DNA载体导入受体细胞，通过选择性培养基筛选出含有重组DNA分子的细胞。

载体选择和构建

选择合适的载体如质粒、噬菌体等，将外源DNA片段插入载体中，构建成重组DNA载体。

限制性内切酶消化

利用限制性内切酶识别和切割特定DNA序列，产生粘性末端或平末端。

基因克隆

将目的基因从供体生物中分离出来，并插入到载体中，构建成基因克隆载体。

转基因动植物

利用显微注射、基因枪等技术将基因克隆载体导入动植物受精卵或胚胎干细胞中，培育出转基因动植物。

转基因微生物

将目的基因导入微生物中，使其获得新的性状或功能，用于生产特定产品或环境治理等。

利用CRISPR-Cas9系统对目标DNA进行精确定位和切割，通过同源重组或非同源末端连接等方式实现基因编辑。该技术具有操作简便、效率高、适用范围广等优点。

CRISPR-Cas9技术

利用人工设计的锌指蛋白识别并结合特定DNA序列，引导核酸酶对DNA进行定点切割和修复。

锌指核酸酶技术

利用转录激活因子样效应物核酸酶识别并结合特定DNA序列，实现基因敲除、敲入等编辑操作。

TALEN技术

03

基因工程表达系统

优点

生长快，操作简便，适用于大量表达；

缺点

缺乏真核生物的蛋白质翻译后加工修饰系统，如糖基化、磷酸化等；

常用原核表达系统

大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等；

应用

生产重组蛋白质、酶、抗体等。

优点

生长较慢，操作较复杂，成本较高；

缺点

常用真核表达系统

应用

01

02

04

03

生产复杂蛋白质、病毒疫苗、基因治疗等。

具有蛋白质翻译后加工修饰系统，可表达复杂蛋白质；

酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统等；

04

基因工程载体与宿主

质粒是一种双链环状DNA分子，具有自主复制能力。作为基因工程载体，质粒具有稳定性好、易于操作、容量适中等优点。

质粒载体

噬菌体是一种专门寄生在细菌中的病毒，其基因组可以整合到宿主细菌染色体中。噬菌体载体具有容量大、转染效率高、可整合到宿主基因组中等特点。

噬菌体载体

病毒具有高效感染细胞并传递基因的能力，因此病毒载体在基因工程中具有广泛应用。常用的病毒载体包括逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等。

病毒载体

真核细胞

真核细胞如酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等，具有更为复杂的基因表达和调控机制，适用于高级基因工程研究，如基因治疗、基因编辑等。

原核细胞

原核细胞如大肠杆菌等，具有生长速度快、易于培养、基因操作简单等优点，常用于基因克隆和表达等研究。

细胞培养技术

为了获得高质量的宿主细胞，需要采用适当的细胞培养技术，包括培养基的选择、培养条件的优化、细胞传代与保存等。

载体转染宿主细胞

通过物理或化学方法将载体导入宿主细胞，使其在细胞内复制和表达外源基因。常用的转染方法包括电穿孔法、脂质体法、病毒感染法等。

载体与宿主细胞基因组整合

某些载体如噬菌体载体和病毒载体，可以将外源基因整合到宿主细胞基因组中，实现稳定遗传。整合过程涉及DNA重组和修复等机制。

宿主细胞对载体的