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药品微生物菌种管理技术规范

1范围

本文件规定了实验室菌种的购进、复活、确认、保藏、使用、销毁、记录等内容。

本文件适用于药品微生物限度检查、无菌检查的菌种处理和保藏。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB4789.28-2013食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB19489实验室生物安全通用要求

《中国药典》2020年版四部

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

标准菌株referencestraine

来自于国内或国际菌种保藏机构的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯，并至少定义到属或种水

平的菌株。

商业派生菌株Commerciallyderivedstrain

由标准菌株的商业衍生物，来自于其它供应商，所有特性与标准菌株等效，具有可溯源性的菌株，

分为定性商业派生菌株和定量商业派生菌株。商业派生菌株仅可用作工作菌株。

标准储备菌株referencereservestrain

标准菌株复活后，再转种至适宜的培养基生长，重新恢复原来的优良特性，即为标准储备菌株。标

准储备菌株可用于制备下一代标准储备菌株或工作菌株。

工作菌株Workingstrain

标准储备菌株转种至适宜的培养基生长，即为工作菌株。工作菌株一般不用来进行传代培养。

代数algebra

从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代。1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基

中培养，任何形式的转种均被认为是传代1次。

4菌种购进

标准菌株应来自认可的国内或国外菌种保藏机构。商业派生菌株应来自能提供溯源性报告和菌种

证明，保证其溯源性以及与标准菌株的等效性的生产厂家。

5菌种复活

1

使处于休眠状态的菌种恢复其生物特征，也称为复苏。通常接种于胰酪大豆胨液体培养基（TSB）

中适宜时间进行复活，或按供应商提供的说明。

6菌种确认和保藏

复壮

标准菌株复活后，再转种至适宜的培养基生长，使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性。

复壮后的菌种方可用于进行确认。

定期确认

验证菌株的特性和纯度，可检查微生物形态、革兰氏染色或用生化试验、分子生物学手段进行鉴定。

保藏

标准菌株经过复壮、确认符合要求后，即可作为标准储备菌株用于保藏。

可将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中并分装于小瓶中，采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温

冷冻（低于-30℃）等方法保藏。

冷冻的标准储备菌株一旦解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷冻或再次使用。

7菌种使用

工作菌株可用于制备菌悬液。

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌：取工作菌

株新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度，即为菌悬液。

黑曲霉：标准储备菌株转种至沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂斜面，20℃～25℃培养

至获得丰富的孢子，加入适量稀释剂（含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液

或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液），将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢

子悬液至无菌试管内，用稀释剂制成适宜浓度，即为菌悬液。

8销毁

废弃菌株的销毁应符合GB19489的要求。

9记录

实验室应建立菌种管理的文件和记录，内容包括菌株的购进、转种、确认、使用、销毁全过程。