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生化分离工程1-2细胞破碎及包涵体处理
汇报人：AA
2024-01-25
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目录
CONTENTS
细胞破碎技术
包涵体处理技术
细胞破碎与包涵体处理在生化分离工程中的应用
案例分析：细胞破碎及包涵体处理在生化分离工程中的实践
实验设计与操作注意事项
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01
细胞破碎技术
高速搅拌法
01
利用高速旋转的搅拌器将细胞悬浮液进行强烈的剪切和撞击，从而使细胞破裂。
研磨法
02
将细胞悬浮液与研磨介质（如玻璃珠、氧化铝珠等）一起放入研磨器中，通过高速旋转或振荡使细胞与研磨介质相互碰撞、摩擦，达到破碎细胞的目的。
高压均质法
03
将细胞悬浮液在高压下通过狭窄的缝隙，使细胞受到强烈的剪切力和冲击力而破裂。
1
2
3
表示被破碎的细胞占总细胞数的百分比，可以通过显微镜观察或流式细胞仪检测来计算。
破碎率
表示从破碎细胞中释放出的蛋白质占细胞内总蛋白质的百分比，可以通过测定上清液中的蛋白质含量来计算。
蛋白质释放率
表示从破碎细胞中释放出的核酸占细胞内总核酸的百分比，可以通过测定上清液中的核酸含量来计算。
核酸释放率
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02
包涵体处理技术
形成原因
外源基因在宿主细胞内的表达过程中，由于表达量过高或者表达产物的特殊性，容易形成包涵体。
特点
包涵体是一种由膜包裹的、高密度的、不溶性的蛋白质颗粒，其直径通常在0.5-3微米之间。包涵体通常含有表达的目的蛋白，但也可能包含宿主细胞的蛋白质、RNA、脂质等杂质。
细胞破碎
洗涤
溶解
纯化
通过物理或化学方法破碎细胞，使包涵体释放出来。常用的细胞破碎方法包括高压匀浆、超声破碎、酶解等。
用适当的洗涤剂或去垢剂洗涤包涵体，去除杂质和膜碎片。洗涤过程中需要注意保持包涵体的完整性，避免目的蛋白的损失。
用强变性剂（如尿素、盐酸胍等）溶解包涵体，使其变为可溶性的形式。溶解过程中需要控制变性剂的浓度和处理时间，以避免目的蛋白的变性或降解。
通过层析、电泳等方法对溶解后的包涵体进行纯化，去除杂质和变性剂，得到纯净的目的蛋白。
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03
细胞破碎与包涵体处理在生化分离工程中的应用
03
去除内毒素等有害物质
细胞破碎后，通过特定方法去除内毒素等有害物质，保证蛋白质类药物的安全性。
01
破碎细胞释放蛋白质
通过物理或化学方法破碎细胞，使细胞内的蛋白质释放出来，为后续分离纯化提供原料。
02
包涵体处理提高蛋白质稳定性
对于某些易变性的蛋白质，通过包涵体处理可以提高其稳定性，便于后续加工和储存。
破碎细胞释放细胞器
通过物理或化学方法破碎细胞，使细胞内的细胞器释放出来，为后续分离纯化提供原料。
包涵体处理提高细胞器稳定性
对于某些易变性的细胞器，通过包涵体处理可以提高其稳定性，便于后续加工和储存。
去除膜碎片等杂质
细胞破碎后，通过特定方法去除膜碎片等杂质，保证细胞器的纯度。同时，根据不同细胞器的特性，采用相应的分离纯化技术，如差速离心、密度梯度离心、亲和层析等，实现细胞器的高效分离纯化。
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04
案例分析：细胞破碎及包涵体处理在生化分离工程中的实践
技术应用
该公司采用高压均质机进行细胞破碎，通过优化破碎参数（如压力、次数等），实现了高效、温和的细胞破碎，同时减少了目标产物的损失。
技术背景
细胞破碎是生物制药过程中获取目标产物的关键步骤，通过破碎细胞释放胞内物质，为后续分离纯化提供原料。
技术优势
高压均质机具有破碎效率高、操作简便、可规模化应用等优点，适用于大规模生物制药生产。
包涵体是基因工程表达产物中常见的形式，由于其结构紧密、难以溶解，给后续分离纯化带来困难。
技术背景
该公司采用化学法（如尿素、盐酸胍等）对包涵体进行变性处理，使其溶解并释放出目标蛋白，然后通过复性技术恢复蛋白活性。
技术应用
化学法处理包涵体具有操作简便、成本低廉等优点，适用于实验室规模或小规模生产。同时，复性技术能够恢复蛋白活性，提高目标产物的得率和纯度。
技术优势
技术背景
细胞器是细胞内具有特定功能的亚细胞结构，如线粒体、叶绿体等。分离纯化细胞器对于研究细胞生物学和疾病机制具有重要意义。
技术应用
该机构采用差速离心法分离细胞器，通过不同转速和时间的组合，将不同大小和密度的细胞器分离开来。然后利用密度梯度离心法进一步纯化目标细胞器。
技术优势
差速离心法具有操作简单、分离效果好等优点，适用于各种类
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