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猪融合抗菌肽基因双质粒共转化重组毕赤酵母菌的构建
陈骞;万小平;肖永乐;唐健雪;赵世纪;高荣
【摘要】为构建高效表达的猪融合抗菌肽蛋白的重组酵母菌发酵表达体系，规模
化生产制备型免疫分子防控动物传染病，本试验从试验室从前构建的pGAPZαA-
P质粒中克隆出已构建好的猪融合抗菌CAMPs基因片段。通过
Infusion技术，将CAMPs片段分别克隆入pPIC9K和pPICZαA真核表达质粒中，
并通过PCR以及测序验证，成功构建了pPIC9K-CAMPs和pPICZαA-CAMPs重组
质粒。通过电转化将线性化pPIC9K-CAMPs转入毕赤酵母GS115基因组中，
并筛选高拷贝菌株GS-PK-CAMPs。再将线性化pPICZαA-CAMPs转入重组酵母
GS-PK-CAMPs中，筛选出高拷贝菌株GS-PKZ-CAMPs。对重组酵母GS-PKZ-
CAMPs进展诱导表达后作转录表达争论，检测抗菌肽是否表达。最终结果显示，
成功获得了GS-PKZ-CAMPs可诱导表达菌株，这给猪融合抗菌肽蛋白的大规模发
酵制备和应用于动物传染病的防治奠定了牢靠的初步根底。%Inorderto
constructhigheffectiveexpressionrecombinantyeasttoproduce
economicallynov-elfusionporcineantimicrobialpeptideinlargescalefor
thecontrolofanimaldiseases,theexperimentwasconductedtoclonethe
fusionCAMPsgenesfromtherecombinantpGAPZαA-Pvectorconstructed
earlyinourlaboratory.Thenthetwofusiongeneswererespectively
insertedintoexpressionplasmidpPIC9KandpPICZαAbyInfusioncloning
technology.Therecombinantplasmids,namedaspPIC9K-CAMPsand
pPICZα-A-CAMPs,weresuccessfullyconstructedandconfirmedbyPCR
andsequencinganalysis.Afterthat,thelinearizedpPIC9K-CAMPswas
insertedintopichiapastorisGS115byelectroporation,andscreenedfor
high-copystrainnamedasGS-PK-CAMPs.ThenlinearizedpPICZαA-
CAMPswasinsertedintorecombinantyeastGS-PK-CAMPsandscreened
forhigh-copystrainnamedasGS-PKZ-CAMPs.Next,inducedfermentation
ofGS-PKZ-CAMPswascarriedouttodetecttheexpressionofCAMPsgene.
ThefinalresultshowedthattherecombinantpichiaGS-PKZ-CAMPsstrains
withdualplasmidstransformationwassuccessfullyobtained,whichlaythe
reliablebasisforfutureproductionoffusionantimicrobialpeptidesto
promotethecontrollevelofanimalinfectiousdiseases.
【期刊名称】《四川畜牧兽医》
【年(卷),期】2016(043)012
【总页数】5页(P28-31,31)
【关键词】猪抗菌;融合基因;共表达;双质粒转化;毕赤酵母
【作者】陈骞;万小平;肖永乐;唐健雪;赵世纪;高荣
【作者单位】四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点试验室，动
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