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实验二十一旋毛虫病肉品检验技术

旋毛虫病是重要的人畜共患寄生虫病，它是由毛形科的旋毛形线虫（Trichinellaspir）al成is虫寄生于肠管，幼虫寄生于横纹肌所引起的。该病流行于哺乳类动物间，鸟类可实验感染。人若摄食了生的或未煮熟的含旋毛虫包囊的猪肉可感染生病，主要临床表现为胃肠道症状、发热、肌痛、水肿和血液嗜酸性粒细胞增多等，严重者可以导致死亡，故肉品卫生检验中将旋毛虫列为首要项目。旋毛虫病的肉品检验是生猪屠宰检疫中的一项重要内容，通过该项检验可以检出感染旋毛虫的猪只。对于杜绝病猪肉流入肉品市场，有着重要的作用。

一、实验目的及要求

掌握肌肉旋毛虫压片镜检法、消化法的操作方法。

了解酶联免疫吸附试验的方法。

掌握旋毛虫病肉的处理方法。

二、实验器材

（一）旋毛虫压片镜检法

材料：被检肉品。

器材：载玻片，剪刀，镊子，天平，显微镜。

试剂：50%甘油水溶液，10%稀盐酸。

（二）旋毛虫集样消化法

材料：被检肉品。

器材：组织捣碎机，采样盘，磁力加热搅拌器，圆盘转动式计数镜检台，集虫器，载玻片，表面皿，烧杯，剪刀，镊子，天平，温度计，显微镜。

试剂：0.04%胃蛋白酶溶液，盐酸。

（三）旋毛虫酶联免疫吸附试验（ELISA）

材料：被检肉品。

器材：滤纸片，玻璃瓶，剪刀，酶标测定仪，反应板，加样器。

试剂：

阳性血清，阴性血清；

旋毛虫抗原；

酶标抗体（又称酶结合物、酶标记免疫球蛋白）；

包被液：NaCO1.59g、NaN0.2g、NaHCO2.93g，用蒸馏水加至1000ml，调整pH为9.6。

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放4℃冰箱中保存备用。

洗涤液：NaCl8.9g、Tween-200.5g、KHPO0.2g、NaN0.2g、NaHPO·12HO2.9g、KCl0.2g，

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用蒸馏水加至1000ml，调整pH为7.4。

底物溶液（OPD-HO）：称取邻苯二胺40mg，溶解于100mlpH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液（0.1M

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柠檬酸24.3m1，加0.2MNaHPO

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25.7ml，加水50ml）中，然后加30％过氧化氢0.15ml，现配现用。

终止液（2MHSO）：浓硫酸22.2ml，蒸馏水177.8ml。

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三、实验方法、步骤和操作要领

（一）旋毛虫压片镜检法

采样。自胴体左右两侧横膈膜的膈肌脚（见图21-1），各采膈肌1块（与胴体编成相同号码），每块肉样不少于20g，记为一份肉样，送至检验台检查。如果被检样品为部分胴体，则可从肋间肌、腰肌、咬肌等处采样。

图21-1取左右膈肌脚样品图21-2 撕开肌膜肉眼观察肉眼检查。撕去被检样品肌膜，将肌肉拉平，在良好的光线下仔细检查表面有无可疑的旋毛虫病灶（见图21-2）

图21-1取左右膈肌脚样品

图21-2 撕开肌膜肉眼观察

制片。取清洁载玻片1块放于检验台上，并尽量靠近检验者。用镊子夹住肉样顺着肌纤维方向将可疑部分剪下。如果无可疑病灶的，则顺着肌纤维方向在肉块的不同部位剪取12个麦粒大小的肉粒

图21-3 制成压片镜检图21-4 旋毛虫幼虫包囊（2块肉样共剪取24个小肉粒）

图21-3 制成压片镜检

图21-4 旋毛虫幼虫包囊

检（见图21-3）。

镜检。把压片标本放在低倍（4×10）显微镜下，从压片的一端第一块肉片处开始，顺肌纤维依次检查。镜检时应注意光线的强弱及检查速度，切勿漏检。

结果判定。

没有形成包囊的幼虫，在肌纤维之间呈直杆状或逐渐蜷曲状态，但有时因标本压得太紧，可使虫体挤入压出的肌浆中。

包囊形成期的旋毛虫，在淡黄色背景上，可看到发光透明的圆形或椭圆形物。包囊的内外两层主要由均质透明蛋白质和结缔组织组成，囊中央是蜷曲的虫体（见图21-4）。成熟的包囊位于相邻肌

细胞所形成的梭形肌腔内。

发生机化现象的旋毛虫。虫体未形成包囊以前，包围虫体的肉芽组织逐渐增厚、变大，形成纺锤形、椭圆形或圆形的肉芽肿。被包围的虫体有的结构完整，有的破碎甚至完全消失。虫体形成包囊后的机化，其病理过程与上述相似。由于机化灶透明度较差，需用50％甘油水溶液作透明处理，即在肉粒上滴加数滴50%甘油水溶液，数分钟后，肉片变得透明，再覆盖上玻片压紧观察。

钙化的旋毛虫。在包囊内可见数量不等、浓淡不均的黑色钙化物，包囊周围有大量结缔组织增生。由于钙化的不同发展过程，有时可能看到下列变化：①包囊内有不透明黑色钙盐颗粒沉着；②钙盐在包囊腔两端沉着，逐渐向包囊中间扩展；③钙盐沉积于整个包囊腔，并波及虫体，尚可见到模糊不清的虫体或虫体全部被钙盐沉着。此外，在镜检中有时也能见到由虫体开始钙化逐渐扩展到包囊的钙化过程（多数是由于虫