(38)--[8.8] “精准作战” ------酶免疫技术在食品检测中的应.ppt

第八章免疫学技术在食品检测中的应用

8.7-8.8“精准作战”--酶免疫技术在食品检测中的应用（下）

38.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用（1）酶联免疫吸附技术(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）原理：将已知的可溶性抗原（抗体）吸附到某种固相载体表面，并保持抗原（抗体）免疫活性，在与待测的抗体（抗原）反应后，只需经过固相的洗涤，就可以达到抗原抗体复合物与其他物质分离，最后结合在固相载体上的酶的量与样本中待检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与待测物的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行待测物质的定性或定量分析。

48.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用（2）酶联免疫吸附技术的优点：①灵敏度高、检测浓度可达1~10ng/mL；②快速，结果可在几个小时内得到；③专一性强，重复性好等。

8.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用（3）酶联免疫吸附技术中常用的酶与底物：①常用的标记酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-Ｄ-半乳糖苷酶等。②常用的底物：底物是根据酶的种类而异。酶：辣根过氧化物酶（HRP）底物：邻苯二胺(OPD）测定波长492nm显示橘红色酶：碱性磷酸酯酶底物：4-硝基酚磷酸盐(PNP)测定波长400nm显示黄色酶：β-Ｄ-半乳糖苷酶底物：硝基酚半乳糖苷(ONPG)测定波长420nm显示黄色。酶：葡萄糖氧化酶底物：ABTS（2，2′-边氮基-双（3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸））测定波长405nm显示黄色

酶底物显色反应测定波长辣根过氧化物酶邻苯二胺

四甲替联苯胺

氨基水杨酸

邻联苯甲胺

2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐橘红色

黄色

棕色

兰色

蓝绿色492460449

425

642

碱性磷酸酯酶4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐黄色

红色400

500葡萄糖氧化酶ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰黄色

深蓝色405420β-Ｄ－半乳糖苷酶甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)荧光

黄色360,450

420

8.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用（4）常用ELISA技术：直接法、间接法、双抗夹心法、直接竞争法等①直接法检测抗原：Ag+Ab*?Ag-Ab*显色

一步法检测抗原：待测抗原底物温育显色固相抗体YYYEY酶标抗体EYEYYYYEYEYEY洗板YYYEYEYEYEYYYYEYEYEY温育②双抗原夹心法：一步法、两步法Ab+Ag+Ab*——Ab-Ag-Ab*——底物-显色

固相抗体温育待测抗原底物温育显色YYYEY酶标抗体EYEYYYYYYYEYEYEYYYYEYEYEYAb+Ag——Ab-Ag+Ab*③双抗原夹心法：一步法、两步法检测抗原

两步法：Ab-Ag-Ab*——底物-显色

④直接竞争ELISA检测抗原

竞争ELISA检测抗原

8.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用⑤直接法检测抗体：Ab+Ag*——Ab-Ag*显色

8.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用②。⑥间接法检测抗体Ag+Ab1?Ag-Ab1Ag-Ab1+Ab2*?Ag-Ab1-Ab2*显色

8.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用（5）ELISA基本操作步骤：①包被：将抗原或抗体以吸附或化学偶联的方法牢固地吸附在固相载体的表面。②洗涤：操作过程中需要多次洗涤，洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质。③酶标记物：酶标抗原或酶标抗体，孵育后再洗涤。④底物：孵育，终止反应，洗涤。⑤显色和测定

DNM-9602G酶标分析仪DNM-9602标配酶标分析仪DNM-9602A酶标分析仪几种酶标分析仪

ELISA试剂盒

Page?18ELISA试剂盒的主要组成

ELISA试剂盒的质量试剂盒的运输和贮存：ELISA试剂盒的效期一般为6个月（贮存温度为2～8oC），但试剂盒从出厂至用户手中，均要经历运输(如送检、检定、发货等)及运输中的贮存，某一环节的处置不当，均会影响试剂盒的临床使用质量。

盐酸克伦特罗的测定（廋肉精）毒素的测定（包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）甲胺磷残留分析甲基对硫磷残留分析呋喃丹残留分析ELISA在食品检测中的应用ELISA用于农药残留的检测

8.7-8酶免疫技术在食品检测中的应用（6