SN_T 1166-2010水泡性口炎检疫技术规范.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T代替SN/T1166.1—2002,SN/T1166.2—2002,SN/T

1166—20101166.3—2006

水泡性口炎检疫技术规范

Quarantineprotocolforvesicularstomatitis

2010-11-01发布2011-05-01实施

中

中华人民共和国

发布

SN/T1166—2010

前言

本标准按照GB/T1.1—2009.给出的规则起草。

本标准代替SN/T1166.1—2002《水泡性口炎补体结合试验操作规程》、SN/T1166.2—2002《水泡性口炎微量血清中和试验操作规程》和SN/T1166.3—2006《水泡性口炎逆转录聚合酶链反应操作

规程》。

本标准与SN/T1166.1—2002、SN/T1166.2—2002和SN/T1166.3—2006相比，主要技术变化

如下：

——增加了水泡性口炎的病毒分离及鉴定；

——增加了荧光反转录聚合酶链反应；

——增加了竞争酶联免疫吸附试验。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检

疫局。

本标准主要起草人：花群义、阮周曦、杨俊兴、杨云庆、秦智锋、吕建强、曾少灵、林庆燕、宗卉、

张彩虹、周晓黎、董俊。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

——SN/T1166.1—2002;

——SN/T1166.2—2002;

——SN/T1166.3—2006。

SN/T1166—2010

水泡性口炎检疫技术规范

1范围

本标准规定了动物水泡性口炎的病毒分离及鉴定、反转录聚合酶链反应、荧光反转录聚合酶链反

应、中和试验、竞争酶联免疫吸附试验的技术要求。

本标准适用于动物水泡性口炎的检验检疫。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是任日期的引用文体，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包插所有的修改单)适用于本文件。

GB/T18088出人境动物检疫采样

3缩略语

以下缩略语适用于本文件。

BHK-21:仓鼠肾细胞

BLP:乳糖蛋白胨缓冲肉汤

CPE:致细胞病变作用

Ck值：每个反应管内的荧光信达到设起的刷值时所经历的循环或

c-ELISA:竞争酶联免疫吸附试验。。

DEPC:焦碳酸二乙酯

McAb;单克隆抗体

OD值：光密度值

PI:抑制百分比

TCID:半数组织培养感染量

Vero;非洲绿猴肾细胞

VSV:水泡性口炎病毒

VSV-IND:水泡性口炎病毒印地安那型

VSV-NJ:水泡性口炎病毒新泽西型

4病毒分离与鉴定

4.1病毒分离

4.1.1样品的采集：按GB/T18088进行。主要采集动物口、蹄冠上或乳头上的水泡上皮组织。采集后立即冷藏送检或置碳酸缓冲甘油(配方见附录A)中低温保藏。采集到的水泡液置灭菌瓶中，冷藏送检或低温保藏。若从冻肉中采样，可采淋巴结或组织；采集的精液样品应不少于1mL,冻精样品每头每

批次取样3管～5管；无症状或无水泡的活动物采集抗凝全血，胚胎及其冲洗液。

4.1.2样品的处理：将采集到的上皮、淋巴结或组织样品，经研磨后用0.01.mol/LpH7.2的PBS(配

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SN/T1166—2010

制见附录A)配制成20%的悬液。精液用乳糖蛋白胨缓冲肉汤(BLP,配制见附录A)作1:5稀释后，经8.000r/min4℃离心30min,弃上清液，并弃去浮游脂肪，再用BLP作1:5稀释成悬液；水泡液、胚胎

冲洗液无需处理，全血用BLP作1:5稀释后，直接用于病毒的分离或鉴定。

4.1.3接种细胞：澄清组织悬液或水泡液与抗生素(含青霉素2000IU/mL、链霉素2000μg/mL)4℃作用30min,接种于BHK-21或Vero细胞单层，37℃.5%二氧化碳培养箱吸附1h,弃去接种物

用细胞培养液洗涤三次，然后加入维持液，置于33℃~35℃5%二氧化碳培养箱中继续培养。

4.2病毒鉴定

采用反转录聚合酶链反应和荧光反转录聚合酶链反应进行病毒分离物的鉴定。接种后2d～3d

出现CPE,需进行鉴定。如无CPE,则盲传三代，仍无CPE,则判为VSV阴性。

5反转录-聚合酶链反应

5.1试剂和材料

5.1:1水泡性口炎病毒标准株

新泽西型(NJ)和印第安那型