专题2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（课件）高二生物同步课堂（提升）（选修1）.pptVIP

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数选修1专题2课题2一、研究思路（一）筛选菌株1.实例：PCR技术：一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。提出的问题—如何寻找耐高温的DNA聚合酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境。原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物。获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2.实验室微生物的筛选原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。本课题使用的培养基

KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4.7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。3.选择培养基问题1：该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。加入青霉素的培养基（1）概念：（2）例子：—细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。不加含碳有机物的无碳培养基—分离自养型微生物。【典型例题】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C.接种了的选择培养基D.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D【变式训练】苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用_____________法。(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于___________________________________________；使用______________________________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是__________________________________________________。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？________________________________________________________________________。苯酚A稀释涂布平板④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基加入了苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数(1)原理:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。(2)具体做法：（3）优缺点：缺点：不能区分死菌和活菌。优点：能准确统计微生物的实际数目。每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，一个大方格中的总菌数是多少?5A1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）5AB×1041mm2.间接计数（活菌计数法）C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（2）原理：稀释涂布平板法。（1）常用方法：计算公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）（）A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4（3）计数【解析】稀释倍数为106，0.1